银杏叶含量测定方法（槲皮素、山奈素、异鼠李素）

   银杏叶为银杏科植物银杏Ginkgo biloba L.的干燥叶。2005版《中国药典》一部采用高效液相色谱法，以槲皮素、山奈素、异鼠李素为对照，测定总黄酮苷的含量。

    一、高效液相色谱法

    2005版《中国药典》银杏叶含量测定项下：

    色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.4%磷酸溶液（50：50）为流动相；检测波长为360nm。理论板数按槲皮素峰计算应不得低于2500。

    供试品溶液的制备：取本品中粉约1g，精密称定，置索氏提取器中，加三氯甲烷回流提取2小时，弃去溶剂，药渣挥干，加甲醇回流提取4小时，提取液蒸干，残渣加甲醇-25%盐酸溶液（4：1）混合液25ml，加热回流30分钟，放冷，转移至50ml量瓶中，并加甲醇至刻度，摇匀，即得。

    用HPLC法测定银杏叶总黄酮苷的含量时，常用的流动相系统为甲醇-磷酸系统。

    ①日本岛津LC-6A系列高效液相色谱仪；色谱柱为YWG-C18（10μm,25cm×4.0mm）；流动相：甲醇-水(含0.4%磷酸)（52：48）；检测器：紫外光检测器；波长360nm；柱温30℃。

    ②Waters高效液相色谱仪；色谱柱为Novaplal C18(300mm×3.9mm,4μm)；流动相：甲醇-水（50：50），磷酸调pH为2.5；检测波长360nm；柱温40℃。

    ③Waters高效液相色谱仪；色谱柱为Spherisor Rb-18(10μm,250×4mm)；流动相：甲醇-水-磷酸（55：44.5：0.5）；柱温25℃；检测波长370nm。

    ④岛津LC-6A高效液相色谱仪；C18柱(10μm,3.9mm×300mm)；流动相：甲醇-0.5%磷酸水溶液(48：52)；检测波长368nm。

    其它如：袁龙测定银杏叶片剂总银杏黄酮的含量，采用岛津LC-10A VP高效液相色谱仪；色谱柱为Hypersil ODS 柱（205mm×4.6mm,5μm）；流动相：磷酸缓冲液（pH2）-四氢呋喃-甲醇-异丙醇（60：15：10：15）；检测波长380nm.

    池静端等用反相高效液相色谱法测定了银杏叶中槲皮素、异鼠李素、山萘酚等6种黄酮成分的含量。采用HP1090型高效液相色谱仪；色谱柱为Zorbax ODS C18 柱(150mm×4mm，5μm)；流动相：A.MeOH, B.四氢呋喃(THF)-H2O-HCOOH(34：65：1)，梯度洗脱；；检测波长350nm；柱温25℃。以单酚酸B(salvianolic acid B)为内标。银杏叶用丙酮和盐酸混合溶液回流提取。     二、毛细管电泳法

    佘佳红等以超临界流体萃取(SFE) 银杏叶粗提物中槲皮素和山奈素, 以胶束电动毛细管色谱法(MECC) 测定这两种成分的含量。SFE条件：压力42mPa；温度60℃；改性剂0.2ml乙醇；动态萃取体积4ml；静态萃取时间4min；接收液乙醇。胶束电动毛细管色谱条件：空心熔融石英毛细管柱(55cm×75μm)；电压18kV；缓冲液的终浓度25mmol/L NaH2PO 46.25mmol/L-Na2B4O7；SDS 35mmol/L；pH8.5；温度29℃；检测波长254nm；进样时间8s。