成骨细胞原代培养实验
实验方法原理 |
采用植块培养方法时,用少量培养液孵育,使骨组织块贴附于培养瓶。骨组织块浮起后观察细胞长出情况。采用分离细胞的单层培养方法时,将松质骨切成 2~5 mm 大小,用胶原蛋白酶和胰蛋白酶消化。将混悬的细胞接种于培养瓶,用 F12 培养液培养。 |
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实验材料 | 骨标本 |
试剂、试剂盒 | Hams F12 培养液 用于细胞传代的胰蛋白酶液 分离成骨细胞的消化液 |
仪器、耗材 | Petri培养皿 培养瓶 手术刀 手术镊 |
实验步骤 |
一、外植块培养 展开 |
注意事项 |
1、实验材料要新鲜,从活体分离材料后要低温保存,并尽快进行细胞分离实验。 2、无菌操作。操作时用的培养液,可加平时细胞培养液5倍含量的青链霉素。 3、用酶法分离细胞时,注意酶液的浓度和控制消化时间。 贴块法分离细胞时,注意动作要轻柔,不要伤到细胞组织,组织块边缘尽量平整有利于细胞游离。 4、培养液的选择。不同的细胞有对培养液中营养的要求不同,根据所分离细胞的特性选择。
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