发布时间:2019-10-31 17:42 原文链接: 酶标仪

操作事项

      酶标仪的功能是用来读取酶联免疫试剂盒的反应结果,因此要得到准确结果,试剂盒的使用必须规范。许多医院在使用酶标仪之前是通过目测判断结果,操作过程随意性较大,在使用酶标仪后如果不能及时纠正操作习惯,会造成较大误差。在酶标仪的操作中应注意以下事项:

1.使用加液器加液,加液头不能混用。

2.洗板要洗干净。如果条件允许,使用洗板机洗板,避免交叉污染。

3.严格按照试剂盒的说明书操作,反应时间准确。

4.在测量过程中,请勿碰酶标板,以防酶标板传送时挤伤操作人员的手。

5.请勿将样品或试剂洒到仪器表面或内部,操作完成后请洗手。

6.如果使用的样品或试剂具有污染性、毒性和生物学危害,请严格按照试剂盒的操作说明,以防对操作人员造成损害。

7.如果仪器接触过污染性或传染性物品,请进行清洗和消毒。

8.不要在测量过程中关闭电源。

9.对于因试剂盒问题造成的测量结果的偏差,应根据实际情况及时修改参数,以达到最佳效果。

10.使用后盖好防尘罩。

11.出现技术故障时应及时与厂家联系,切勿擅自拆卸酶标仪。(擅自拽板是酶标仪损坏的重要原因)


常识梳理

  1. 为什么酶标仪的标准配置包括405nm,450nm,490nm及630nm四块滤光片具有紫外功能的酶标仪还配备有340nm.


       目前用于酶联免疫吸附测定,常使用的标记用酶是辣根过氧化物酶(HRP),对应的底物通常为四甲基联苯胺(TMB)和邻苯二胺(OPD)。底物在过氧化氢溶液的存在下,经辣根过氧化物酶作用,分别氧化为2,2,—二氨基偶氮苯(DAB)和联苯醌。邻苯二胺(OPD)的氧化产物DAB,在pH值为5.0左右时,在450nm波长处有大吸收,此时可用450nm的滤光片测定吸光值。当加入强酸作为终止试剂终止反应时,pH值降到接近0,此时大吸收波长移至492nm,此时可用492nm的滤光片测定吸光值。

       四甲基联苯胺(TMB)的氧化产物联苯醌,一般在波长为450nm处有大消光系数。使用硫酸作为终止剂可使产物稳定90min,便于检测。因此,450nm和492nm两个波长是目前ELISA测定常用的。有的酶标仪以490nm滤光片替代492nm滤光片,影响不大。

       除了这两个基本滤光片外,考虑到双波长比色的需要,还应有620nm或630nm或650nm和405nm波长的滤光片,双波长比色主要用于消除非特异干扰的影响。

       如果实验需要用酶标仪作微量生化测定,就需要扩展紫外检测功能,此时需要一个340nm波长滤光片。

       总之,以上介绍的是常用的几个波长的滤光片,用户还可以根据自己的需求选择其他波长的滤光片。一般各种酶标仪都配有放置滤光片的可自动转换的部件,可以同时安装6~8片滤光片,可以满足用户的不同需求。

      

     2.酶标仪分类

A.按照功能的划分,酶标仪可以分为光吸收酶标仪,荧光酶标仪,化学发光酶标仪多功能的酶标仪.

       光吸收酶标仪是用来进行可见光与紫外光吸光度的检测.特定波长的光通过微孔板中的样品后,光能量被吸收,而被吸收的光能量与样品的浓度呈一定的比例关系,由此可以用来定性和定量的检测.光吸收的检测技术成熟,成本低,操作简单,但是动态范围窄,灵敏度比较低,特异性不强.一般可见光和紫外光分别采用钨灯及氘灯作为光源,发展的主流是LED光源,而紫外/ 可见酶标仪是可以将两种光源进行切换,适应不同测量波长的需求。