实验方法原理
吸附在根表面的α-萘胺会被植物根所氧化,生成红色的2-羟基-1-萘胺沉淀于具有氧化力的根表,使这部分根染成红色。 根对α-萘胺的氧化力与其呼吸强度,主要是与呼吸酶过氧化物酶活性有着密切关系,据认为α-萘胺氧化过程是在过氧化物酶的催化下进行的,该酶的活力愈强,对α-萘胺的氧化力就愈强,染色也就愈深。所以,可以根据染色深浅定性地判断根的活力。 | |
实验材料 | |
试剂、试剂盒 | |
仪器、耗材 | |
实验步骤 | 一、材料仪器设备及试剂 1. 材料:水培水稻等植物根系 2. 仪器设备:分光光度计,电子分析天平,振荡器,刻度试管(或普通试管),试管架,移液管(10 ml、2 ml、1 ml),移液管架,吸水纸,洗耳球,黑纸,100 ml三角瓶,100 ml量筒。 3. 试剂及配制: 50μg· ml-1 α-萘胺母液的配制:精确称取0.1000g分析纯α-萘胺溶于约50 ml蒸馏水中(微微加热),冷却后定容至100 ml,即为1000μg· ml-1α-萘胺溶液,保存于棕色瓶中,置低温黑暗处保存。使用前吸取1000μg· ml-1α-萘胺溶液50 ml加蒸馏水稀释至1000 ml即为50μg· ml-1α-萘胺母液。 1%对氨基苯磺酸溶液配制:称取1g对氨基苯磺酸溶于100 ml 30%乙酸中。 100μg· ml-1亚硝酸钠溶液配制:称取0.1g亚硝酸钠溶于1000 ml蒸馏水中。 0.1mol·L-1磷酸缓冲液(pH7.0): A液:称取纯Na2HPO4·2H2O11.876g溶于蒸馏水中成1000 ml。 B液:称取KH2PO49.078g溶于蒸馏水中成1000 ml。 用时取A液60 ml,B液40 ml混合即成。 二、实验步骤 1. α-萘胺标准曲线的制作 (1)取6支20 ml刻度试管,编号,按下表配制每管含量为0~50μg的α-萘胺标准溶液。 加入表中试剂后,摇匀,置于室温(20~25℃)显色5min,然后加入蒸馏水,使每管总体积为20 ml,摇匀,在20~60min内,以0号管为空白对照,在520nm波长处测定每管吸光度(A)值。 (2)标准曲线绘制 以1~5号管的α-萘胺含量为横坐标,吸光度值为纵坐标绘制标准曲线。 2. 根系处理及空白实验 (1)把待测定水稻根用水洗净,再用吸水纸吸干根上的水后,称取1~2g,放入100 ml三角瓶中,加入50μg· ml-1的α-萘胺溶液和磷酸缓冲液的等量混合液50 ml轻轻摇动。 (2)静置10min后,根的迅速吸附业以完毕,从瓶中取2 ml溶液放入20 ml刻度试管测定α-萘胺含量(见下方法3),以此作为开始值(第一次取液)。其余的溶液塞好瓶塞后,放在振荡器上,在25℃下反应振荡3~6 h(无振荡器时,要在反应期间,定时摇动)。反应时间完毕后再取2 ml溶液放入刻度试管,待测(第二次取液)。因萘胺溶液会自动氧化,所以在做根系处理时要同时做无根的同样操作的空白实验。 3. 测定 在上述二次所取及二次空白实验所取得2 ml测定液中,各加入10 ml蒸馏水,混匀后再加入1%对氨基苯磺酸1 ml和100μg· ml-1的亚硝酸钠溶液1 ml。混匀,置室温(20~25℃)显色5min,然后加入蒸馏水,使总体积为20 ml,摇匀,在20~60min内,以标准曲线0号管为空白对照,在520nm波长处测定吸光度(A)值。 三、结果计算 根据第一次和第二次样液所测得的吸光度值,从标准曲线查出α-萘胺含量,按下公式计算α-萘胺氧化值。 四、按下表记录实验数据及结果 作物根系活力测定(α-萘胺氧化值)记录表 |
注意事项 | α-萘胺在空气中会被自动氧化,注意保存。 |
其他 | 1. α-萘胺标准曲线的制作参考:http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2015/01/A1420622582png_small.jpg 2. 计算α-萘胺氧化值公式 http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2015/01/B1420621392png_small.jpg 3. 作物根系活力测定(α-萘胺氧化值)记录表 http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2015/01/A1420622588png_small.jpg 4. 更多可参考https://wenku.baidu.com/view/6535e846591b6bd97f192279168884868662b87f.html |
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