电泳仪基本类型

电泳仪有纸电泳仪、醋酸纤维素薄膜电泳仪、薄层电泳仪、凝胶电泳仪、等电聚焦电泳仪、等速电泳仪、免疫电泳仪、电泳转移仪、双向电泳仪和毛细管电泳仪等类型。

一、纸电泳仪：

1、方法：

以滤纸作为支持载体，水平架在两个装有缓冲液的容器间，样品点于滤纸中央。当滤纸被缓冲液润湿后盖上绝缘密封罩，即可输入直流电进行电泳。

2、特点：

（1）电压越高，带电粒子的迁移速度越快，分离时间越短。

（2）装置简单，分辨率低。

二、醋酸纤维素薄膜电泳仪：

1、方法：

以醋酸纤维素薄膜作为支持载体，电泳结束经染料染色后，用适当试剂使膜透明，然后用光密度仪扫描测定。

2、特点：

（1）分离速度快。

（2）醋酸纤维素薄膜经过冰醋酸乙醇溶液或其它透明液处理后可透明，有利于对电泳图的光吸收扫描测定和膜的长期保存。

三、薄层电泳仪：

1、方法：

将载体与缓冲液调制成适当厚度的薄层进行电泳。

2、常用支持物：

有淀粉、琼脂、纤维素粉和硅胶等。

四、凝胶电泳仪：

凝胶电泳是以凝胶作为支持载体的电泳技术。

1、聚丙烯酰胺凝胶电泳仪：

可将血清蛋白分离出20多个区带。

广泛用于分离某些蛋白质和较小分子的核酸。

2、琼脂糖凝胶电泳仪：

（1）区带易染色，干燥后背景几乎无色，便于光密度扫描检测。

（2）电泳速度快，血清样品无需处理即可直接加样进行检测。

（3）可用于分离血清蛋白、血红蛋白和脂蛋白等。

3、淀粉凝胶电泳仪：

（1）方法：

淀粉凝胶电泳仪是以淀粉凝胶作为载体的电泳技术。凝胶铺厚些，可一层一层的剥层分析（一板多测），可用于同工酶分析。已很少使用。

（2）特点：

1）天然淀粉经加工处理即可使用，但凝胶孔径可调性差。

2）不同批次淀粉凝胶之间的质量相差很大，很难得到重复的电泳结果。

3）电泳时间长，操作麻烦，分辨率低。

五、等电聚焦电泳仪：

1、蛋白质的等电点pI：

两性蛋白质分子的表面带有COOˉ羧基和NH₃⁺氨基，当溶液酸碱度在某一pH值时，分子所带正、负电荷相同（即净电荷为零），这时蛋白质分子在电场中不会移动，此pH值称为该蛋白质的等电点pI。

（1）当pH＜pI时，溶液相对于等电点呈酸性，蛋白质带正电，在电场中向负极移动。

（2）当pH＞pI时，溶液相对于等电点呈碱性，蛋白质带负电，在电场中向正极移动。

2、等电聚焦概念：

设溶液的pH值是位置的函数，样品在一个线性pH梯度的溶液中电泳时，每种被分离的两性物质在移向与其等电点一致的pH位置后不再移动，称为聚焦。因这点净电荷正负抵消为零，故又称等电聚焦。

3、特点：

（1）区带狭窄，很小样品也能获得清晰的区带界面。

（2）分辨率高。

（3）电泳速度快。

（4）适用于分离中、大分子量生物组分，如蛋白质。

六、等速电泳仪：

1、方法：

等速电泳是基于有效离子淌度的差异进行带电离子的分离，属于不连续介质电泳，需要两种缓冲液。

前导电解液：含有与溶质离子电荷相同且淌度为体系中高的离子。

尾随电解液：体系中淌度低的离子。

样品离子的淌度介于这两者之间。

2、特点：

（1）所有区带以同一速度移动。

（2）区带锐化，界面清晰，分离能力强。

（3）区带浓缩，即各区带中离子的浓度为定值。

七、免疫电泳仪：

1、方法：

免疫电泳是将电泳和免疫反应相结合，先利用电泳将蛋白质组分分离，再分别与抗体反应进行检测分析。

电泳中，样品中的抗原通过含有相应抗体的pH = 8.6的琼脂糖凝胶薄层，抗原在pH = 8.6时通常带强负电，而抗体在此pH不带电而不能迁移。抗原在含有抗体的凝胶中电泳时发生免疫反应。初抗原过量，仅产生可溶性的免疫混合物，与抗原一起向阳极移动。当抗体与抗原比例合适时，形成大的不溶性的免疫沉淀。

2、类型：

（1）扩散免疫电泳：用于纯化抗原、抗体成分分析和体液蛋白质识别分析等。

（2）对流免疫电泳：常用于以已知抗体检测相应的抗原。

（3）火箭免疫电泳：抗体量不变时，火箭峰的高度与抗原量成正比。

（4）固定免疫电泳：常用于M蛋白质的分型鉴定。

八、电泳转移仪：

1、方法：

电泳转移仪又称电泳印迹仪，是利用低电压、大电流的直流电场使凝胶电泳的分离区带或电泳斑点转移到特定的膜上，如硝化纤维素膜、PVDF膜、阳离子尼龙膜和重氮化纸等。

蛋白质印迹将高分辨率的电泳技术与灵敏、专一的免疫探测技术结合起来，用针对蛋白特定氨基酸序列的特异性试剂作为探针进行检测。对于蛋白质，通常使用的探针是抗体，它与附着于固定基质上的靶蛋白发生特异性反应。

2、特点：

电泳印迹相当于将一次电泳的结果复制成几份，再进行蛋白质、同工酶的放射自显影和免疫检测等，大大提高了效率，是当前分子生物学研究的热门技术。

九、双向电泳仪：

1、方法：

向根据蛋白质的等电点不同在pH梯度凝胶中进行等点聚焦。

第二向根据蛋白质的分子量大小不同在垂直或水平方向进行SDS－PAGE电泳。

2、特点：

（1）可多次获得相同的印迹复本，做多次分析鉴定。

（2）灵敏性高，试剂用量少，速度快，操作简便。

十、毛细管电泳仪：

毛细管电泳是以毛细管为分离通道，以高压直流电场为驱动力，利用荷电粒子之间的淌度差异和分配系数差异进行分离，是分析科学继液相色谱之后的又一重大进展，使分析科学从微升级进入到了纳升级水平，不仅使单细胞乃至单分子分析成为可能，也使蛋白质和核酸等生物大分子分析有了新的转机。