常用溶液的配制

一、常规溶液

(一)1/15mol/L PBS(磷酸缓冲液Phosphate Buffer Solution，PBS)

甲液：1/15mol/L Na₂ HPO₄ 溶液

Na₂ HPO₄                    9.465g

蒸馏水                    加至1000ml

乙液：l/15mol/L KH₂ PO₄ 溶液

KH₂ P0₄                      9.07g

蒸馏水                    加至1000m1

分装在棕色瓶内，于4℃冰箱中保存，用时甲、乙两液各按不同比例混合，即可得所需pH的缓冲液,见下表:

(二)0.3％台盼兰染液

称取台盼兰(Trypan blue)粉0.3克，溶于100ml生理盐水中，加热使之完全溶解，用滤纸过滤除渣，装入瓶内室温保存。

(三)0.5％酚红指示剂

酚红                      0.5g

0.1N(0.4％)NaOH           15ml

双蒸水                    85ml

将0.5克酚红置研钵中，缓漫滴加0.1NNaOH溶液边加边磨，并不断吸出已溶解的酚红液，直至全部溶解，然后加入85ml双蒸水，颜色为深红，经粗滤纸过滤后使用，室温保存。

(四)5.6％NaHCO₃ 溶液

称NaHCO₃ 5.6克，溶于100ml蒸馏水中，室温保存即可(如需要也可10磅15分钟高压灭菌，4℃冰箱保存)

(五)10μg／ml秋水仙素

秋水仙素                    lOmg

生理盐水                    100ml

装入茶色瓶中，为贮备液，4℃冰箱中保存。甩时取贮备液1ml加生理盐水9ml即可。

(六)0.4％KCl-0.4％柠檬酸钠低渗液

将0.4％KCl和0.4％柠檬酸钠两液等量混合即可，室温保存。

(七)2％柠檬酸钠

称取柠檬酸钠2克，加100ml双蒸水即可，室温保存。

（八）0.2％次甲基兰染液

称次甲基兰(Methylene blue)0.2克，加蒸馏水100ml，室温保存。

(九)0.5％醋酸洋红(Aceio Carmine)染液

洋红                    lg

醋酸                    90ml

蒸馏水                  110ml

将90ml醋酸加入110ml蒸馏水煮沸，然后将火焰移去，立即加入1克洋红，使之迅速冷却过滤，加饱和氢氧化铁(媒染剂)水溶液数滴，直到呈葡萄酒色。室温保存。加铁使洋红沉淀于组织而着色。此染液室温存放时间越长效果越好，室温保存。

(十)1％甲苯胺兰(Toluidine blue)

称取甲苯胺兰1克，加蒸馏水lOOml。

(十一)1/3000中性红染液

取中性红(Neutral red)0.1克，加蒸馏水300ml。室温保存。

(十二)Giemsa染液

1．贮备液

Giemsa粉                    1g

纯甘油                       66ml

甲醇                         66ml

先将Giemsa粉置于研钵中加少量甘油，充分研磨，呈无颗粒的糊状。再将全部甘油加入，放入56℃温箱中2小时，然后加入甲醇，保存于茶色瓶中。一般两周后使用为好。

2．工作液

临用时将贮备液与pH6.8的磷酸缓冲液按照1:20混合。

(十三)埃利希(Ehrlich)苏木精染液

苏木精                    1.0g

乙醇                      50ml

醋酸                      5ml

甘油                      50ml

硫酸铝钾                    5g

蒸馏水                      50ml

将苏木精溶于少量的乙醇中，再加醋酸并搅拌，以加速其溶解。当苏木精溶解后将甘油加入并摇动容器，同时加入其余的乙醇；硫酸铝钾需研磨并加热，然后溶解于蒸馏水中，将其一滴滴地加入上边的溶液，并不断摇动，此液配好后，将瓶口用纱布盖好，置通风处，经常摇动以加速其成熟，成熟约需4周左右，成熟的染液为深红色。

二、细胞化学和细胞组分分离溶液

(一)M一缓冲液

眯唑(Imidazole)                    3.404g

KCI                                3.7g

MgCl₂ ・6H₂ O                         101.65mg

ECTA                               380.35mg

EDTA                               29.224mg

巯基乙醇                           0.07ml

甘油                               297ml

蒸馏水                             加至1000ml

用lNHCl调pH至7.2室温保存。

(二)2％Triton X一100溶液

量取2mlTriton X一100(聚乙二醇辛基苯基醚)液，加M缓冲液98ml即可。

（三）0.2％考马斯亮兰R-250染液

甲醇                               46.5ml

醋酸                               7.0ml

考马斯亮兰                         0.2g

蒸馏水                             加至100ml

(四)A．0.1％碱性固绿染液(pH8.0～8.5)

1．0.1％固绿水溶液

固绿(Fast green)                    0.1g

蒸馏水                              100ml

2．0.05％Na₂ C0₃ 溶液

Na₂ C0₃                                50mg

蒸馏水                              100ml

用时按1:1体积混合即可。

B．0.1％酸性固绿染液(pH2.2)

1．0.1％固绿水溶液。

2．mol／L×75盐酸液

盐酸(比重1.19)0.109ml加蒸馏水至100ml

用时按l:1混合。

(五)甲基绿一哌咯宁染液

1.1mol／L醋酸缓冲液(pH4.8)：

(1)醋酸                         17ml

蒸馏水                          加至200ml

(2)醋酸水                       13.5g

蒸馏水                              加至lOOml

用时分别取两液40ml、60ml混匀即可。

2．甲基绿一哌咯宁(methyl green―Pyrcnln)

5％哌咯宁水溶液                 6ml

2％甲基绿水溶液                 6ml

蒸馏水                          16ml

lmol/L醋酸缓冲液               16ml

lmol/L醋酸缓冲液临用时才可加入染液中。

(六)Schiff试剂

将碱性品红0.5克加入lOOml沸水，持续煮沸5分钟，并随时搅拌，待冷却到50℃时过滤到棕色瓶中，加1N HC11O毫升，冷却至25℃时加入1克NaHSO₃ ，此时需很好的振荡，避光过夜。次日取出(呈淡黄色)加0.25克活性炭剧烈振荡1分钟。过滤后即得Schiff试剂。避光低温保存。

(七)联苯胺混合液

联苯胺(4.4 Diamino benzidine)       0.2g

95％乙醇                            lOOml

3％过氧化氢                         2滴

此液临用时配制。

(八)l％番红水溶液

番红(Safranin)                      1.0g

蒸馏水                              100ml

(九)1％SDS(十二烷基硫酸钠Sodium dodecyl sulfate,SDS)

SDS                                 10g

45％乙醇                            100ml

(十)1mol／LTris(三羟甲基氨基甲烷/盐酸缓冲液Trihydroxy methylaminomethane Tris/HCL)pH7.8

Tris                                 12.114g

蒸馏水                               lOOml

先将Tris溶于少量蒸馏水，用HCI调pH至7.8，然后加水至100ml

(十一)Ringer Solution

氯化钠(冷血动物用0．65克)           0.9克

氯化钾                               0.042克

氯化钙                               0.025克

蒸馏水                               100ml

(十二)淀粉肉汤培养基

蛋白                                 2g

淀粉                                 6g

牛肉汤                               100ml

用10％NaHCO₃ 调pH至7.0～7.2

(十三)0.25mol／L蔗糖一0.003mol／L氯化钙溶液

蔗糖                                 85.5g

氯化钙                               0.33g

蒸馏水                               1000ml

(十四)1％詹纳斯绿B染液

取詹纳斯绿(Janus green B)1.0g Ringer氏液100ml

(十五)1％刚果红染液

刚果红                              1g

蒸馏水                              100ml

(十六)Gomori硝酸铅作用液

0.05mol／L醋酸缓冲液(pH5)          lOOml

0.6醋酸加蒸馏水200ml、取其         42ml

醋酸钠1.36g加蒸馏水200ml，取其158ml共200ml

B-甘油磷酸钠                        2g

醋酸铅                              2g

5％氯化镁                           5ml

以上作用液在临用时配制，最终在pH5～5.2，过滤使用。

(王世藩  汇编)

三、细胞培养和细胞融合溶液

(一)0.01mol／LPBS(磷酸盐缓冲液Phosphate Buffer Saline，PBS)pH7.2。

0.2mol／L磷酸氢二钠液(甲液)：

NaH₂ PO₄ ・12H₂ O                       35.814g

双蒸水                              加至500ml

0.2mol／L磷酸二氢钠液(乙液):

NaH₂ PO₄ ・12H₂ O                       15.601g

双蒸水                              加至500ml

取甲液36ml，乙液14ml和NaCl8.2克，加双蒸水至1000ml。混匀待完全溶解分装，经高压灭菌后保存于4℃冰箱备用。

(二)50％PEG(聚乙二醇Polyethyleneglycol mwl500)

称取0.5克PEG，用前放入试管中在酒精灯火焰上熔化，加入等量37℃予热的MEM培养液，混匀，保温在37℃水浴中待用。

(三)MEM培养液(含10％小牛血清)

MEM培养液(日本制药株式会社)        9.4g

双蒸水                             1000ml

NaHCO₃                               1.5g

谷氨酰胺(L-glutamin)               0.292g

56℃灭活30分钟的小牛血清110ml

MEM粉末加水溶解后，用NaHCO₃ 调pH到7.1(因在抽滤过程中pH升高0.2～0.3)，然后加灭活的小牛血清和谷氨酰胺，待完全溶解后，立即用G₆ 抽滤除菌，分装，置4℃冰箱保存备用。

(四)0.25％胰蛋白酶一0.02％EDTA混合消化液

胰蛋白酶(Trypsin)粉                 0.25g

EDTA粉                             20.0mg

0.01mol／L PBS                      100ml

先用少量PBS溶解胰蛋白酶，然后将EDTA粉末和剩下的液体加入混合，置37℃水浴中1小时左右(待彻底溶解，液体呈透明为止)，用G₅ 抽滤，分装置4℃冰箱中保存。

(五)Hanks液

1．原液甲

NaCl                                 160g

KCl                                  8g

MgSO₄ ・7H₂ O                           2g

MgCI₂ ・6H₂ O                           2g

溶于800ml馏水中。

CaCl₂ (无水)                           2.8g

溶于100ml蒸馏水中。

将两种液体混合后，加水至1000ml用滤纸滤过，再加2ml氯仿防腐，置4℃冰箱备用。

原液乙

Na₂ HPO₄ ・12H₂ O                         3.04g

KH₂ PO₄                                  1.2g

葡萄糖                                20.0g

溶于800ml蒸馏水中，用滤纸过滤，然后加0.5％酚红80ml，再加水至1000ml，最后加入2ml氯仿防腐，置4℃冰箱备用。

2．使用液

甲乙两液各1份，双蒸水18份，混匀分装包扎好瓶口，经10磅15分钟高压灭菌后置4℃冰箱中保存。使用时用5.6％NaHCO₃ 调pH值到所需要求。

(六)1640培养液(含lO％小牛血清)

RPMI-1640粉                           10.39g

双蒸水                                 加至1000ml

通入适量的C0₂ 气体，边通入CO₂ 边慢慢搅拌，使其(呈透明)完全溶解。用NaHCO₃ 1.5克调pH值到7.2。

双抗1万u/ml                          10ml

灭活小牛血清                           110ml

混匀上述液体，立即用G₆ 抽滤除菌分装，置4℃冰箱备用。

(七)青、链霉素溶液

青霉素钠盐(40万u／瓶)                 5瓶

链霉素(100万u／瓶)                    2瓶

将两者溶于200ml0.9％的无菌生理盐水，分装小瓶，-30℃保存。双抗在培养基中的终浓度为各lOOu为宜。

(八)二甲基亚砜诱导HL-60细胞分化使用的终浓度为1。4％。

(九)BrdU溶液(200ug/m1)

用无菌青霉素瓶，在室温下称取1.0mg，在无菌条件下加入灭菌生理盐水9.0ml，溶解，混匀，用黑纸包严，避光置冰箱冰格中保存。最好用时现配。

(十)2×SSC溶液

用分析天平称取氯化钠17.53克，柠檬酸钠8.82克溶于蒸馏水中，加蒸馏水至1000毫升。

（十一）3％琼脂：

取琼脂粉3克，加入双蒸水到100毫升，搅匀，高压消毒后(15磅20分钟)，冷藏备用，使用前重新加热煮沸(贮存时间不宜过长)。

四、制备电镜标本的溶液

(一)2.5％戊二醛溶液

25％戊二醛                    lOml

0.1mol／L二甲砷酸钠缓冲液

装入茶色瓶中，保存于4℃冰箱备用。

(二)0.1mol／L二甲砷酸钠缓冲液

二甲砷酸钠                    10.70g

蒸馏水                         500ml

将二甲砷酸钠置于500ml容量瓶中，先加水约400ml，震荡使其溶解，用HCl调pH到7.4，加入剩余蒸馏水，4℃冰箱保存。

(三)包埋剂

环氧树脂Epon812                56.30g

DDSA(十二烷基琥珀酸酐Dodecenyl succinic

anhydride，DDSA)                14.60g

MNA(甲基内次甲基邻苯二甲酸酐Methyl Nadic)

anhydride，MNA                  29.00g

混合上述三种包埋剂成分，搅拌30分钟使其充分混匀。再加加速剂2,4,6一三(二甲氨基甲基)苯酚(2，4，6-tridimethyl aminomethylphenol，DMP-30)1.5ml，继续搅拌30分钟，置于干燥罐中(室温)备用。

(四)2％单宁酸

单宁酸                           2g

双蒸水                           100ml

溶解后过滤装茶色瓶中，4℃冰箱保存。

(五)高锰酸钾固定剂

柠檬酸三钠                       60mmol/L

氯化钾                           25mmol/L

氯化镁                           35mmol/L

高锰酸钾                         125mmol/L

pH为7.4-7.8，装茶色瓶中，4℃冰箱中保存，有效期2个月左右。

(六)1％OsO₄ 溶液

OsO₄                              0.5g

0.1mol/L二甲砷酸钠缓冲液。      50ml

OsO₄ 一般为0.5或1克安瓶中封闭包装，配制时剥去商标，用自来水洗净，放洗涤液中泡4～12小时后用水冲洗，在安瓶上划痕，用蒸馏水洗净，投入茶色瓶中，加缓冲液，用玻璃棒在瓶中捣碎，轻轻摇动放冰箱中，48小时后完全溶解。此药蒸气对人眼、角膜、鼻腔和口腔粘膜有固定作用，用时特别小心，在通风橱内操作。

五、显影、定影溶液

(一)D-72显影液

温水(52℃)                        750ml

米吐尔                            3g

无水亚硫酸钠                      45g

对苯二酚                          12g

无水碳酸钠                        67.5g

溴化钾                            19g

水                                加至1000ml

D-72显影液为通用显影液，既能显影胶片又能用于相纸显影。

使用原液，20℃显影时间1～2分钟可得高反差。

加水1:2稀释后使用可得较低反差。1:1稀释使用。20℃时显影时间3～4分钟可得正常反差。

(二)SB-1停显液配方

水                                1000ml

28％醋酸                          48ml

停显时间lO秒左右。

(三)F-5酸性坚膜定影液

水                                750ml

硫代硫酸钠                        240g

无水亚硫酸钠                      15g

28％醋酸                          48ml

硼酸                              7.5g

钾矾                              15g

水                                1000ml

定影时，药液温度应保持在18~20℃定影时间10~15分钟。

配药原则

配制时先取容量3/4的清水，水温50℃左右，按配方的顺序，把称好的药逐一加入，只有前一药品溶解后，方可放入第二种药品，并继续溶解下去，最后将清水加至全量。

配完后要经12小时，待各种药品充分作用后才能使用。

上述各种溶液配制好后，匀应贴瓶签，注明名称，浓度及配制日期，并按规定方法保存，用前检查有无变质或污染现象后，方可使用。