手把手教程：实验室检测艾滋病这样做

中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心继发布《全国艾滋病检测技术规范（2009 年版）》后，近日即将发布 2015 年版《全国艾滋病检测技术规范》，此规范堪称艾滋病检测实验室的「红宝书」，适用于疾病控制中心艾滋病确认实验室和医疗机构的艾滋病初筛实验室的 HIV 检测技术操作。

今天来一起了解一下 HIV 是如何在实验室内被检测并被确诊的。

检测项目的样品种类

1. HIV 抗体检测：全血、血清、血浆、口腔黏膜渗出液、尿液以及干血斑样品。

2. HIV 抗原检测：全血、血清、血浆、病毒培养上清液。

3. T 淋巴细胞亚群测定：EDTA 或肝素抗凝全血。

4. HIV-1 病毒载量、基因型、耐药检测：血浆、滤纸干血斑（DBS）。

5. HIV 核酸定性与定量、基因型检测和 HIV-1 分离培养：淋巴细胞富集液、外周血单核淋巴细胞（PBMC）及全血。

当然，实验室最常用的仍然是血液标本，其他只作为补充样本。

HIV 抗体检测

HIV 抗体检测是艾滋病实验室检测的优先选择项目，在国内绝大多数初筛实验室应用最广泛。

1. 初筛方法

（1）酶联免疫吸附试验（ELISA）

ELISA 法检测 HIV 抗体是 HIV 初筛实验室最常用最普遍的方法，目前检测试剂已经发展到第四代，即同时检测血液中 HIV-1P24 抗原和 HIV-1/2 抗体，秉承「宁可错杀一千，不可漏网一个」的革命精神，其灵敏度远高于特异性，直叫 HIV 抗体无处遁形。

（2）化学发光或免疫荧光试验（CIA/IFA）

这个试验方法是近 10 年迅猛发展的一种新型检测方法，其采用发光或荧光底物，既可检测抗体，也可联合检测抗原抗体，用发光或荧光仪测定结果，其灵敏度较 ELISA 有了进一步的提高，同时带来的是检测成本的增加和假阳性率的增高。

（3）快速检测（RT）方法

此类方法操作简便快速，适用于应急检测、门诊急诊检测，但灵敏度和特异性远不如 ELISA 和发光法，但是经济实惠，也有一定的市场影响力。主要包括以下几种方法：明胶颗粒凝集试验（PA）、免疫渗滤试验、免疫层析试验。

2. 确认实验

（1）免疫印迹试验（WB）

WB 采用间接法检测样品中的抗 HIV-1/HIV-2 特异性抗体。采用聚丙烯酰胺凝胶电泳把分子量大小不等的 HIV-1 蛋白分离开来，经过一系列处理后，硝酸纤维素膜显示与特异抗原的结合的抗体条带，从而确诊抗体的存在。

（2）条带 / 线性免疫试验（RIBA/LIA）

实验原理基本同 WB 法，不再赘述。

HIV-1 抗原检测

1.  筛查实验

（1）酶联免疫吸附实验（ELISA 法）：即第四代抗原抗体联合检测试剂盒。抗体包被固相反应孔（管）的底部，待测样本中 P24 抗原与包被抗体形成抗原抗体复合物，再加入酶（HRP）标记的 HIV-1 抗体与抗原结合，加底物显色，在酶标仪上读取结果。因同时检测抗原抗体，灵敏度大大提高，有效缩短了 HIV 感染的检测窗口期，但因试剂成本较高，在普通筛查实验室推广有一定难度。

（2）酶联荧光分析法（ELFA）：待测样品的 p24 抗原与包被在固相孔（管）内的 p24 抗体结合，并被生物素标记的 p24 抗体识别。临床实验室应用前景不明朗，需要荧光检测设备，成本较高。

（3）电化学发光法（ECLIA）：待测样品的 p24 抗原与包被抗体的磁性微粒和发光剂标记的抗体在反应管中温育，形成磁性微珠包被抗体 - 抗原 - 发光剂标记抗体复合物。

（4）抗原抗体快速检测法：同快速方法（RT）检测抗体，不同之处是用 HIV 抗体包被载体，检测灵敏度同样较差。

2. 中和试验

中和试验主要是 p24 抗原检测的补充试验，还可做 HIV-1RNA 的定性或定量检测，以排除筛查试验的假阳性。

（1）酶联免疫吸附实验（ELISA 法）：待检样品先与中和剂（p24 抗原的抗体）共同孵育，如果样品中存在 p24 抗原，中和抗体将与之结合形成复合物，而不能与固相载体上的捕获抗体结合。

（2）酶联荧光分析法（ELFA）：原理和检测步骤同上述酶联免疫吸附实验（ELISA 法），中和率 ≥ 60 %，认为样品中的 p24 抗原是真阳性。

（3）电化学发光法 (ECLIA)：原理和检测步骤同上述酶联免疫吸附实验（ELISA 法），中和率大于 50%，认为样品中的 p24 抗原是真阳性。

HIV 核酸检测

目前国内 HIV 核酸检测试剂主要为 Taqman 实时荧光 PCR 检测试剂，可检测血浆、血清、组织器官或血液制品的 HIV-1RNA 和 DNA，DBS 可用于检测 RNA/DNA。全球目前正式用于临床诊断 HIV-1 急性期感染的核酸检测试剂比较少，主要是美国 FDA 批准的 Gen-Probe 公司生产的 Aptima HIV-1 RNA 核酸定性检测试剂和欧盟批准的 Abbott M2000 HIV-1 RNA/DNA 定性检测试剂。

临床诊断相关的检测策略及结果报告

HIV 检测阳性结果的检测过程一般经历两个阶段，初筛和复检程序。以 HIV 抗体检测为例，具体流程如下：

试剂 1 进行初筛，结果无反应，报告「HIV 抗体阴性」；结果有反应，不能出具阳性报告，必须进入复检试验。对初筛有反应的样品，用原有试剂双份或双孔进行复检试验（或者两种试剂复检），如均无反应，报告「HIV 抗体阴性」；如均有反应或一个有反应一个无反应，进行补充试验（抗体确证试验和 HIV-1 核酸试验），报告 HIV 感染待确定。

目前大部分临床实验室为艾滋病初筛实验室，开展常规初筛实验，发现阳性结果初步复检后送省市 CDC 或当地其他确认实验室做确认实验。临床诊断筛查检测流程见下图：

目前国内实验室多采用「初筛抗体 +WB 法确认」等两步法进行 HIV 检测及确诊，并严格进行人员、仪器、方法学质量控制，建立了遍布全国的临床医疗机构的初筛实验室及省市 CDC 的确认实验室，基本满足了日益增长的艾滋病病人的检测及病情的变化的监测。