液相色谱法
改进了GB/T 23377测定食品中脱氢乙酸的高效液相色谱标准方法。用氢氧化钠溶液提取样品中的脱氢乙酸,用高效液相色谱(HPLC)紫外检测器测定脱氢脱蛋白,并与标准系列进行了比较。
2实验部分
仪器与主要试剂
液相色谱仪:奥普斯高效液相色谱仪
脱氢乙酸的标准产物:纯度为99.6%,
甲醇:色谱纯。
醋酸铵溶液(0.02mol/L):分析纯,称取醋酸铵1.54g用氨水(1+1)调节pH至9.0加水至1000m L溶液中,用0.45μM滤膜过滤。
色谱条件
色谱柱:C18 柱 (5μ m,250mm×4.6mm);
流动相:甲醇0.02mol/L醋酸铵(595,v)
流速:1.0mL/min
柱温:40℃
检测波长:293nm
在上述色谱条件下,注入脱氢乙酸标准溶液:
样品处理
5×10g样品(准确至0.0001g),加入50 ml水,用氢氧化钠溶液(8g/L)调节pH至7.2,加入5ml醋酸锌溶液(220 g/L),5ml铁氰化钾溶液(106 g/L),超声提取40 min,恒容100 ml,静态30 min 0.45μm滤膜进行液相色谱测定。
方法讨论
色谱条件选择
GB/T 23377-2009国家标准方法中,流动项为甲醇+0.02mol/l乙酸铵(10+90,V/V)考虑到食品中其他添加剂对脱氢乙酸(山梨酸、糖精钠等)测定的影响,甲醇-0.02mol/L醋酸铵(595,v)的流动相比国标法要好。
线性关系
在实验条件下脱氢乙酸标准工作液在0.5-100μg/ml范围内与响应值的峰面积呈良好的线性关系,相关系数r=0.99999脱氢乙酸的检测浓度为0.1,g·mL·L~(-1)·L~(-1)·L~(-1)。
准确度与精密度
按本方法测定,做加标实验,每 一浓度重复测定6 次实验结果表明,该方法回收率满意,相对标准偏差小于10%重复性好符合检测要求。