HPLC法测定饮料中的邻苯二甲酸酯

图1.  标准品色谱图

本文采用高效液相色谱法对某饮料中的邻苯二甲酸酯的含量进行了测定。邻苯二甲酸二乙酯、邻苯二甲酸二丁酯、邻苯二甲酸二（2-乙基己）酯和邻苯二甲酸二辛酯在5~100 μg/ml的浓度范围内线性良好，加标回收率在75%以上。结果表明RIGOL L-3000高效液相色谱仪充分满足方法对系统适应性的要求，检测结果精准可靠，重现性好。

塑化剂在工业生产里有着广泛的应用，它是塑料改性剂的统称，用来提高塑料强度。邻苯二甲酸酯类可增强塑料的可塑性和柔软性，在这次塑化剂风波中的邻苯二甲酸二（2-乙基己）酯也属于邻苯二甲酸酯类。而起云剂则是我们常说的乳化稳定剂，主要用于饮料、奶制品等。常见的原料是阿拉伯胶、乳化剂、棕榈油等。本次事件就是不法厂商用塑化剂取代了成本更高的棕榈油。

实验部分

仪器与试剂

RIGOL L-3000高效液相色谱仪（包括：RIGOL L-3120溶剂组织器、L-3220二元高压梯度泵、L-3300自动进样器、L-3400柱温箱以及L-3500紫外-可见检测器）；RIGOL C18色谱柱（250mm*4.6mm*5μm）甲醇（Fisher公司，色谱纯）；邻苯二甲酸二乙酯（阿拉丁公司，分析纯）；邻苯二甲酸二丁酯（阿拉丁公司，分析纯）；邻苯二甲酸二（2-乙基己）酯（阿拉丁公司，分析纯）；邻苯二甲酸二辛酯（阿拉丁公司，分析纯）

图2.  某饮料样品色谱图。

试样制备

1.邻苯二甲酸酯的标准曲线

精确称取邻苯二甲酸二乙酯、邻苯二甲酸二丁酯、邻苯二甲酸二（2-乙基己）酯和邻苯二甲酸二辛酯，配制成浓度分别为1mg/ml的标准储备液备用。

图3.  某饮料样品加标回收色谱图。

分别精密移取5ml、2.5ml、1ml、0.5ml、0.25ml标准储备液至25 ml容量瓶中，用甲醇定容至刻度，作为标准溶液，其浓度分别为：100μg/ml、50μg/ml、20μg/ml、10μg/ml、5μg/ ml。

2.样品的制备

精密移取1ml某饮料至10ml容量瓶中，用正己烷/甲醇（1/2）溶液定容至刻度，超声30 min，用氮吹仪吹干后再用1ml 100%甲醇溶解，用0.45μm滤膜过滤后待用。

表1.   HPLC分析的梯度洗脱程序

精密移取1ml某饮料至10 ml容量瓶中，加入0.35 ml的100 μg/ml的标准溶液，用正己烷/甲醇（1/2）溶液定容至刻度，超声30 min，用氮吹仪吹干后再用1 ml 100%甲醇溶解，用0.45 μm滤膜过滤后待用。

色谱条件

色谱柱：RIGOL Compass C18, 5μm, 4.6mm×250 mm；柱温：40℃；进样体积：20μL；流速：1.0 ml/min；梯度洗脱程序见表1，运行时间：35 min（包括10 min平衡色谱柱）；检测波长：275 nm。

表2.  邻苯二甲酸酯的精确度实验结果

实验结果

精密度实验

采用保留时间定性，在上述色谱条件下，4种邻苯二甲酸酯类化合物得到较好分离，经单个标准样品定性，出峰顺序依次为：邻苯二甲酸二乙酯、邻苯二甲酸二丁酯、邻苯二甲酸二（2-乙基己）酯和邻苯二甲酸二辛酯。分离谱图见图1。20 μg/ml的标准溶液进样6次，其保留时间和峰面积的RSD%见表1。

标准曲线

采用外标峰面积法定量，以峰面积对质量浓度进行线性回归，线性方程、相关系数和检出限见表3。

表3.  邻苯二甲酸酯的线性方程、相关系数和检出限

样品测试

采用相同色谱条件进行样品测试，测试结果表明此饮料中没有检出邻苯二甲酸酯类物质。谱图见图2。

加标回收

采用相同色谱条件对加标后的样品进行测试，测试结果表明：邻苯二甲酸二乙酯、邻苯二甲酸二丁酯、邻苯二甲酸二（2-乙基己）酯、邻苯二甲酸二辛酯的回收率分别为76.2%、86.9%、88.0%和86.8%。色谱图见图3。

结语

使用RIGOL L-3000高效液相色谱仪可以快速简单地测定饮料中邻苯二甲酸酯的含量。由谱图可知，四种邻苯二甲酸酯没有干扰，可以精确测定其含量。通过加样回收实验，测定其回收率为75%以上，定量结果准确可靠。此法为饮料中邻苯二甲酸酯的含量测定提供了一个快速简单的方法。