固相微萃取GCMS／MS方法应用（二）

6．2 内标化合物

6.2.1 香豆素（5,6,7,8-D4），浓度为100 μg/mL的丙酮溶液

（Ehrenstorfer博士提供）

6.1.2 二环己基甲醇，纯度98%（Sigma-Aldrich）

7． 标准物质制备

7．1 调味剂的标准储备液（1000 μg/mL）：称取25.00 mg调味剂化合物（根据标准物质的实际纯度重新计算用量）加入容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至25 mL。该溶液可在4°C至少保存3个月。

7．2 七种调味剂的工作标准溶液（1 μg/mL，对香豆素浓度为10 μg/mL）：分别移取25 μL 浓度为1000 μg/mL的侧柏酮、薄荷呋喃、草蒿脑、胡薄荷酮、甲基丁子香酚和β-细辛脑储备液，和250 μL 浓度为1000 μg/mL的香豆素储备液于25 mL容量瓶中，加入水稀释至刻度线（得到10 μg/mL的香豆素工作液；其他6种为1 μg/mL）。工作标准溶液需要每次使用前现配。

7．3 内标化合物二环己基甲醇的标准储备液（1000 μg/mL）：称取25.00 mg化合物（根据标准物质的实际纯度重新计算用量）加入容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至25mL。该溶液可在4°C至少保存3个月。

7．4 内标化合物二环己基甲醇的工作标准溶液（10 μg/mL）：移取100 μL 浓度为1000 μg/mL的二环己基甲醇的标准储备液至10 mL容量瓶中，加入水稀释至刻度线。工作标准溶液需要每次使用前现配。

8.仪器

9. 消耗品

10.分析流程

仪器准备：在使用仪器前或准备用SPME模式进行分析工作前，请仔细阅读Thermo Scientific TriPlus仪器操作指南的相关章节和Thermo Scientific TriPlus标准操作流程的第IV部分内容。其描述了在SPME手柄和萃取头安装过程中所有必需的维护注意事项。

10.1 样品制备

固体或半固体基质样品

10.1.1 将150 g样品在高速搅拌机（适用于汤羹、酱汁、蒜酱）或威力实验搅拌机（适用于固体基质，如牛奶什锦早餐）中搅拌5 min，得到均匀的样品。然后准确称取0.1 g 3样品直接放入顶空样品瓶中。

10.1.2 使用合适的微量移液器分别移取10 μL二己基甲醇的工作标准溶液、10 μL香豆素-d4的标准溶液和9980 μL水加入顶空样品瓶中。液体基质样品

10.1.3称取0.1 g样品直接放入顶空样品瓶中，并使用合适的

微量移液器移取10 μL二己基甲醇的工作标准溶液、10μL香豆素-d4的标准溶液和9980 μL水加入顶空样品瓶中。

10.1.4 上述两种情况下都需要加入2.5 g NaCl, 并使用带PTFE/丁基橡胶隔垫的样品盖和样品钳盖紧样品瓶。

10.1.5使用下列空白食品代表性每类基质进行空白校正。

•液体基质样品（主要指酒类）的空白样品：40 %的乙醇水溶液。

•半固体基质样品（主要指酱汁和蒜酱）的空白样品：纯番茄酱汁。

•固体基质样品（主要指牛奶什锦早餐）的空白样品：燕麦粥。

•对于固体和半固体基质样品，标准溶液和内标样品的

用量见表1，对于液体基质样品其对应的标准溶液和内标样品用量见表2。

10.2 SPME自动化分析

10.2.1 使用涂覆100 μm的聚二甲基硅氧烷纤维(PDMS-100)，并按照生产厂商推荐的方法将纤维插入GC进样器，预处理备用。

10.2.2将含测试样品的顶空样品瓶放置在样品托盘中（最大可放置54 个样品瓶），并加载SPME自动进样器。

10.2.3 开始SPME分析程序。其操作程序为：在50℃条件下将样品旋转（液体形成漩涡）5 min，将纤维头插入样品瓶的顶部空间，并在溶液漩涡条件下于50℃萃取40min；然后将纤维转移至进样口并于250 ℃脱附5 min。该程序结束后，将纤维头转移到第二个进样口（取代老化平台）进行清洗并于250 ℃老化处理5 min。

10.3 GC分析

GC分析工作在带自动SPME分析系统的TRACE GC Ultra™仪器系统上进行（Thermo Fisher Scientific, Austin, TX USA）。GC分析条件为：

色谱柱：TraceGOLD TG-5MS， 5% 二苯基和95%二甲基聚硅氧烷为固定相（30 m长，内径0.25 mm，膜厚0.25μm)

进样模式：不分流

进样口温度：250 ℃

左侧载气流量：1.2 mL/min

分流量：50 mL/min

不分流时间：3 min

老化进样口温度：250℃

右侧载气流量：0.1 mL/min

传输管线温度：250℃

炉温：60℃保持1 min, 以15℃/min加热到120℃，保持2 min；

再以30℃/min加热至280℃保持10 min。