如何避免支原体污染的应对策略

培养细胞时，

发现细胞增殖变慢、

形态渐渐改变，

是血清或培养基的问题吗？

很有可能是你的细胞污染了~~~~~

支 原 体 污 染

细胞污染可分为细菌、霉菌、酵母菌、支原体污染，其中支原体污染发生的概率>50%。支原体(Mycoplasma) 是最小的原核生物，约0.1-0.3μm，可穿透0.22-0.45 μm 过滤膜 （BI血清经过3次0.1μm滤膜并且检测支原体)。

支原体污染棘手的原因之一是没有如其他污染源“立即可辨”的现象，支原体污染侵袭细胞但是并不一定致死。如果您的细胞出现如下状态：增殖变慢、形态变差、培养液变黄但是没有浑浊，说明您的细胞可能正遭受支原体的摧残！！

受支原体污染的293T              正常无污染的293T

支 原 体 检 测

怎么知道您的细胞正遭受支原体摧残呢，常见的检测方法几种：

1. 分离培养法

将可疑样本接种到支原体培养基中，观察菌落生成。缺点:培养时间长，须3~5周才能判断。

2.DNA荧光染色法

利用荧光染剂 (Bisbenzimide, Hoechst 33258) 检测支原体污染，但若有些细胞易有荧光背景，可能会干扰结果判读。

3.PCR法

利用特异性引物，经PCR反应检测支原体DNA，灵敏且快速。

BI EZ-PCR支原体检测试剂盒：采用PCR法，简化了细胞培养中支原体污染的检测过程，可检测出细胞培养实验中常见的支原体污染。

试剂盒中包含独特的反应混合液，以及PCR中需要的所有试剂。使用者只需备有样品，最后产物跑完胶后，如有一个270bp的片段，则代表有支原体污染，整个检测过程耗时约4小时。

支 原 体 污 染 处 理

细胞培养常见的支原体污染为6种： 发酵支原体(M.fermentans)，唾液支原体(M.salivarum)，口腔支原体(M.orale)，精氨酸支原体(M.arginini)，猪鼻支原体(M.hyorhinis)，莱氏无胆甾原体(A.laidlawii)等，有些是动物来源，有些是人来源，支原体没有细胞壁，所以使用青霉素等破坏细胞壁类药物不具效用，建议使用专为支原体开发的处理试剂保护您珍贵的细胞。

支原体污染处理试剂：

BIOMYC-1 Antibiotic Solution 100X，货号：03-036-1B/C/D。

BIOMYC-2 Antibiotic Solution 100X，货号：03-037-1B/C/D。

BIOMYC-1 需BIOMYC-2按先后联合使用。   

BIOMYC-3 Antibiotic Solution 100X，货号：03-038-1B/C/D。

上述处理试剂可去除90%以上实验室常见的支原体污染 (支原体非单一物种，无单一试剂能100%去除支原体污染)，不具细胞毒性，方法非常便捷。

支 原 体 污 染 预 防

俗话说，预防胜于治疗，所以操作的器材与环境消毒也至关重要：

1. 超净工作台预防

BI也提供Pharmacidal (货号: IC-110100)作为相应的处理试剂，Pharmacidal可有效预防真菌（和孢子），细菌（和孢子），支原体和病毒 (包括HIV和Hepatitis B) 的生长和污染。Pharmacidal成分为四苯甲基化合物，可生物降解，无毒，无刺激，对一般的工作台和器材表面没有任何损伤。不需稀释，每次使用超净工作台前或每天喷洒一次台面，二氧化碳培养箱每两周一次喷洒消毒，喷洒后让其自然风干，无需擦拭。

2.水盘为维持培养箱湿度所必需，但也成为潜在的污染源

BI的 Aquaguard-1 (货号: 01-867-1B 100ml, 稀释100倍使用) 消毒水盘效果非常好，而且不会腐蚀不锈钢，无毒，不挥发。

3.其他实验室的水浴环境也容易造成污染

BI的Aquaguard-2 (货号: 01-916-1E 50ml, 稀释500倍使用)，可以有效消毒任何形式的水浴环境。