超滤实用小技能

是否提供无热源的超滤管

建议用Turbo系列，用1N NaOH溶液室温浸泡1小时，3000g离心，弃去剩余溶液。在使用无热源水3000g冲洗两次注意，赛多利斯超滤离心管系列，只有Turbo可以进行上述操作，而其他材质的膜，要考虑对NaOH的耐受性。比如，相对于RC膜，经过NaOH处理后，将会影响过滤速度和回收效果。

需要浓缩到一定的倍数？其实可以通过超滤管控制

首先，Vivaspin超滤管有最小回收体积，保证至少回收30ul的样本，并且不会让过长的离心时间导致样品离干。另外，如果需要浓缩一定的倍数，使用超滤管也可以直接完成，不需要另外的步骤。首先，预先计算外管液体达到滤过孔的刻度线的位置需要的体积，然后减去样品要滤出的体积，就是需要预先加入外管的缓冲液的体积。先在外管中加入计算得到的缓冲液，待滤出液的体积流入外管缓冲液中，使液面达到滤出孔，则样品不再浓缩，浓缩倍数得到了固定，看，样品浓缩就是那么简单！

可以用超滤管分离外泌体吗

答案是可以的，除此之外核酸，纳米微球颗粒，多糖，病毒都可以用超滤的方法，而且超滤不会破坏外泌体的结构。对于外泌体，推荐使用过滤设备进行杂质去除（Minisart或Sartolab RF/BT系列），然后用超滤设备（Vivaspin或Vivaflow系列）进行外泌体的浓缩。具体步骤如下：

a) 收集培养液，离心去除细胞和细胞碎片后，使用0.2um针头式滤器（Minisart系列，适合1-100mL样品）或正压/负压过滤器（Sartolab RF/BT系列，适合100-15,000mL样品）过滤去除囊泡等大颗粒物质

b) 样品使用Vivaspin超滤管（≤20mL），Vivacell超滤杯（20-250mL），或vivaflow 膜包（100ml-5L）超滤制备外泌小体。

最后要补充的是，超滤是大分子脱盐、浓缩最方便的方法！它重复性好，已经在蛋白、抗体、病毒、外泌体、核酸、囊泡等样品制备中建立标准操作。所以，听说真正会用正确使用超滤管的文化人都在用赛多利斯的兼具年代感和时尚feel的超滤管啦！快点来看看我们详细的说明，选择一款你顺手合心的浓缩神器吧！

Vivaspin超滤管系列具有ZL的尖角死体积样品安全保护技术，防意外甩干，给珍贵的样品更多一道保障！另外，根据蛋白的分子量和体积的不同，Vivaspin系列有多达24种不同选择。样品处理体积包括从100μl到20ml，截留分子量也涵盖了2KDa到0.2um。

其实已经有很多前辈用Vivaspin超滤管收集外泌体了，参考文献：

【1】Robert Gastpar, Mathias Gehrmann,Maria A. Bausero,Heat Shock Protein 70 Surface-Positive Tumor Exosomes Stimulate Migratory and Cytolytic Activity of Natural Killer Cells, Cancer Res 2005; 65: (12). June 15, 2005, 5238-5247

【2】M. Lucrecia Alvarez, Mahdieh Khosroheidari, Rupesh Kanchi Ravi and Johanna K. DiStefano, Comparison of protein, microRNA, and mRNA yields using different methods of urinary exosome isolation for the discovery of kidney disease biomarkers, Kidney International (2012) 82, 1024–1032; doi:10.1038/ki.2012.256; published online 11 July 2012