如何选定qPCR实验用纯水仪？

目前疫情的防控工作取得了阶段性的成效，基于实时荧光定量PCR的核酸检测技术在新冠病毒快速鉴定及确诊中发挥了重要作用。

什么是实时荧光定量PCR？

实时荧光定量PCR（Quantitative Real-time PCR）技术，简称qPCR,是在PCR反应体系中加入荧光物质（荧光染料或荧光标记的特异性探针），利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。

与普通PCR相比，实时荧光定量PCR技术是一次由定性技术向定量技术的飞跃。运用该项技术，可以对DNA、RNA样品进行相对定量、绝对定量和定性分析。

实验流程：

在实时荧光定量PCR实验中，可以分为样本采集，RNA提取，RNA质量鉴定，反转录及数据分析几个步骤，在进行引物、模板的稀释，试剂的配制和补足反应体系时都会用到水，水质量的好坏直接影响最终数据分析的结果。

水中的颗粒物，离子含量，有机物及细菌微生物等杂质对实验都会带来影响，最值得关注的因素有以下两个方面：

1. DNA酶和RNA酶

DNA酶和RNA酶能够特异性地降解DNA和RNA。在进行实时荧光定量PCR时，去除这两种酶从而保证提取的RNA和DNA样本的完整性十分关键。尤其在提取RNA的时候，RNA极易被降解。这是因为RNase非常稳定，且无处不在，用常规的高温高压蒸汽方法和蛋白酶抑制剂不能使所有的RNase完全失活。如果样本中的核酸被降解，会影响检测结果的准确性，甚至造成假阴性检测结果。

因此，实时荧光定量PCR实验用超纯水必须有效降低DNA酶和RNA酶的含量，减少对实验的影响。

2. 镁离子

实时荧光定量PCR实验需要根据不同的引物对和模板确定最佳的镁离子浓度。

Mg2+浓度过低，会影响DNA聚合酶的活性，导致产量降低，影响实时定量的敏感性；

Mg2+浓度过高，会增加引物二聚体的形成，这会影响特异性。

因此，实时荧光定量PCR实验用超纯水必须控制Mg2+浓度，避免背景因素带来的不确定性。

综上，实时荧光定量PCR实验推荐使用超纯水，水质要求如下图所示：

纯水仪器选型推荐：

根据上述的分析和用水指标，可以采用乐枫的Genie G一体超纯水机和Genie PURIST超纯水机，这两种纯水设备都可以满足实时荧光定量PCR反应的用水要求。