(此研究来自于华东师范大学刘华清等人)
摘要:通过热板法及醋酸扭体法观察中华眼镜蛇心脏毒素(CTX)对成年昆明种小鼠疼痛的影响，通过Y型电迷宫及穿梭箱法研究CTX对东蓖若碱诱发成年昆明种小鼠学习记忆障碍的影响，利用跳台法研究CTX对东蓑若碱诱发成年BABL/C小鼠学习记忆障碍的影响，利用Morris水迷宫法研究CTX对东蓖若碱诱发成年C57BL/6J小鼠学习记忆障碍的影响。实验发现，CTX能明显增加热刺激引起的疼痛闭值，明显减少醋酸引起的扭体次数，并能显著增加小鼠在Y型迷宫实验中的正确反应次数，减少在穿梭箱实验中小鼠重新训练至学会标准的训练次数及小鼠的反应时间，能增加小鼠在跳台法中的潜伏期，减少错误反应次数，减少小鼠在Morris水迷宫实验中的寻台时间和游泳路程，以上效果均表现出明显的剂量依赖性。以上结果提示，CTX有良好的镇痛作用以及对东莫若碱诱发的小鼠学习记忆障碍的改善作用，这可能是由于CTX与眼镜蛇神经毒素(NT)三维结构相似而导致了相似的生物学效应。
一.实验方法
1.Y型电迷宫法
昆明种小鼠雌雄各半。Y型电迷宫底部通以35v交流电，以小鼠受电击后直接逃至左
侧安全区为正确反应，以小鼠连续10次中反应正确8次为训练至学会的标准。24h后，将已经学会的小鼠随机分组，各组间达到学会标准的训练次数不存在显著性差异(P>0.05) o于测试前45min给药，空白组与模型组ip生理盐水，阳性组ip 0.1mg/kg HupA,CTXl,CTX2,CTX3组分别ip CTX 0.03,0.06,0.12mg/kg，测试前30min除空白组外其余5组均按5mg/kg体重给药剂量ip东蓑若碱。测试记忆成绩，以固定测试10次中的正确次数作为评价指标。（Y型迷宫视频分析系统由上海欣软信息科技有限公司提供，Y迷宫分为食物奖赏型和电刺激型，因不同的实验需要提供不同的实验装置）。
2.穿梭箱法
昆明种小鼠雌雄各半。以蜂鸣声刺激为信号，延迟5s以后同侧施加35v交流电刺激。
小鼠在蜂鸣声开始后5s之内到达安全区为正确反应。训练至小鼠在连续5次中正确4次为学会的标准。24h后，将已学会的小鼠随机分成6组，各组间达到学会标准的训练次数不存在显著性差异(P>0.05)。给药方法与Y型电迷宫方法相同。记录下每只小鼠从蜂鸣声开始到到达安全区的时间作为反应时，以反应时和重新训练至5次中正确4次所需要的训练次数作为评价指标。（穿梭箱视频分析系统由上海欣软信息科技有限公司提供，上海欣软独家研发的SuperAPAS穿梭箱视频分析系统采用了最先进的识别算法，根据不同的实验环境采用不同的识别算法，与其它穿梭视频分析软件相比，SuperAPAS穿梭箱视频分析系统具有准确率高、能够适应不同的实验环境、测试指标多等特点）
3.跳台法
BABL/C小鼠雌雄各半，训练小鼠在平台上3min不接触底部铜栅为学会的标准。24h后将已学会的小鼠随机分组，各组间达到学会标准的训练次数不存在显著性差异(P>0.05)。给药方法与Y型电迷宫方法相同。小鼠在测试中第一次接触底部铜栅的时间作为潜伏期，小鼠在5min内接触铜栅受到电击的次数为错误次数，以潜伏期和错误次数作为评价指标。（跳台仪器由上海欣软信息科技有限公司提供，目前该仪器已被广大高校和医疗所采用，效果反响良好）
4.Morris水迷宫法
Morris水迷宫，直径74cm，深度为48cm，小鼠站立平台的直径为7.3cm，平台高度24cm，实验时水深为25cm。用新鲜奶粉将水调至不透明状[ys)0实验采用C57BL/6J小鼠，雌雄各半，先将小鼠放置于平台上30s。将小鼠分别面朝壁放人水中，至寻找到平台，并在平台上停留30s。每只小鼠允许最长游泳时间为120s，超过120s则用筛引导至平台，并停留30s。每只小鼠每天训练4次(分别以迷宫4个不同象限为出发点)，每次间隔30s。记录小鼠寻台时间，作为学习成绩。连续训练5天后，按学习成绩将小鼠分为6组，每组10只。各组间寻台时间不存在统计学差异(P>0.05)。给药方法与Y型电迷宫方法相同。将所有小鼠从同一起点(与平台所在位置相对)出发，记录寻台时间，游泳路程。 所有数据以x士S表示，以t检验统计组间差异。（Morris水迷宫视频分析系统由上海欣软信息科技有限公司提供，上海欣软的水迷宫占据了市场的大壁江山，该款水迷宫采用最先进的ABS工程塑料，与不锈钢和铁皮等材料相比，具有轻便性、韧性好、保温系数高、不生锈、易清洗等特点而受到了广大科研人员的青睐吗，而其独有的Supermaze视频分析系统采用了国内顶尖的识别算法，提高了实验的准确性）
三.实验结果
CTX 0.06mg/kg与0. 12mg/kg组的小鼠Y型电迷宫实验中的正确次数明显高于模型组(P<0.O1)，其中CTX 0, 12mg/kg组小鼠的正确次数与阳性对照组相似(P>0.05) o
CTX 0.06mg/kg与0.12mg/kg组的小鼠在穿梭箱实验中的反应时间与记忆重现所需的训练次数也明显低于模型组(P<0.O1)，其中CTX 0.12mg/kg组的小鼠记忆成绩与阳性对照组相当(P>0.05)。在跳台法实验中，CTX 0.06mg/kg与0.12mg/kg组的小鼠在潜伏期明显高于模型组(P<0.O1)，而错误次数显著低于模型组(P<0.O1) , CTX 0.12mg/kg组的小鼠记忆成绩与阳性对照组相当(P>0.05) o CTX 0.06mg/kg与0.12mg/kg组的小鼠在水迷宫实验中的寻台时间和游泳路程都明显低于模型组(P<0.O1) , CTX 0.12mg/kg组的小鼠记忆成绩与阳性对照组相当(P>0.05)。以上结果均表现出剂量依赖性。