流式细胞仪光源的那点事

激光是一种相干光源，它能提供单波长、高强度及稳定性高的光照，是细胞微弱荧光快速分析的理想光源。细胞处在快速运动的状态，每个细胞经过光照区的时间仅为微秒左右，每个细胞所携带荧光物质被激发产生荧光信号的强弱与被照射的时间和激发光的强度有关，只有细胞接受到足够的光照，才能产生相应可被检出的信号。通常小型流式细胞仪的激光功率在20mW，而贝克曼的CytoFLEX采用的固体激光器最小功率为50mW，最大可达80mW。

应用在流式细胞仪上的激光器可分为两类：1.气体激光器：利用气体或蒸气作为工作物质产生激光的器件。与固体、液体比较，气体的光学均匀性好,因此,气体激光器的输出光束具有较好的方向性、单色性和较高的频率稳定性。但气体的密度小，不易得到高的激发粒子浓度，因此，气体激光器输出的能量密度一般比固体激光器小。2.固体激光器：用固体激光材料作为工作物质的激光器，固体激光器可作大能量和高功率相干光源，目前大多数高端流式细胞仪采用此种激光器。

针对不同的荧光染料需要匹配不同颜色的激光，常用的有405nm的紫激光，488nm的蓝激光，638nm的红激光。其中488nm蓝激光为最常用的激光，贝克曼CytoFLEX是唯一最多可配置3个激光器的小型流式。不要被多色分析所迷惑，只有配备了个数更多、功率更大的激光器的仪器才真正具备强大的性能。