试剂、试剂盒 溶液与缓冲液LoTEcDNA标签连接酶
实验步骤
实验方案 A 和 B
1.将切下并纯化的双标签连接为串联体:
2.在 16t℃ 下孵育 2 h。
3.将双标签串联体上取样于 8% 的聚丙稀酰胺凝胶的一个泳道，用 100bpladder 作为分子量标准，在室温、80℃ 电泳 3 h。
4.EB 染色。
5.将含有 400bp 或更大串联体的凝胶区切下。
6.如同实验方案 8 所描述的那样，从切下的凝胶片段中纯化 DNA 以分离双标签片段。但不要在 37°C 而是在 65℃ 下孵育，离心前不需干冰/乙醇冰浴。
7.沉淀后，用 70% 乙醇冲洗沉淀物 2 次，晾干后重新溶于 40ul 的 LoTE 中