花粉萌发与花粉管生长的观察实验

实验方法原理 花粉是种子植物的雄配子体，它们在雄蕊的花药中产生。在有性交配过秤中，携带着父本的遗传信息的花粉粒经由虫媒或风媒传粉而落置在母本的柱头上，花粉萌发出花粉管把该雄配子体内产生的精子送到雌配子体中完成受秸作用。尽管被子植物和裸子植物的花粉粒及其所落置的雌性结构均有极大的小同，但花粉的萌发和花粉管儿长都是有性生殖过程中必定要经历的过程。有活力的花粉及花粉在雌性结构上的萌发、花粉管生长及花粉管之间的竞争是产生足量的有潜在适应能力子代个体的前提、采用体外萌发的方法，通过检测花粉萌发率来了解花粉的活力；利用荧光染料对花粉管进行染色，则可以在荧光显微镜下观察到花粉管在雌性生殖器官中的生长途径。

实验材料 花粉

试剂、试剂盒 染液

仪器、耗材 培养皿

实验步骤

1 花粉的体外萌发试验

在花粉萌发和花粉管伸长的体外试验中，常用的培养某是蔗糖溶液或含蔗糖的琼脂培养基。各种植物的花粉萌发要求的蔗糖质虽浓度不同，一般为 2%-20%, 某些水生植物的花粉在蒸馏水中有更高的萌发率。培养基中加人 0.01%的硼酸，对多数植物花粉萌发都有促进什用。有些植物的花粉要在加有蔗糖的明胶培养基上才有较好的萌发效果。

用液体培养基时，由于花粉沉降而导致萌发不计，可以采用悬滴培养法，也可以采用玻璃纸作为支传物来进行花粉萌发。使用琼脂培养基时，培养某倒在凹玻片上或者小培养皿中，使于在显微镜下观察。

在研究花粉萌发时，首先应采用不同浓度的蔗糖、硼酸的组合配制培养基，从中筛选适当的配方。花粉粒放入培养基后，应选择在最适温度下培养'一般情况下，花粉在培养基上培养数十分钟至数小时即可观察到其萌发出花粉管，实验过程应确定在培养了一致的时间后开始统计萌发率。－般将花粉管长度超过花粉直径 2倍以上判定为己萌发，计算已萌发花粉在视野中全部花粉中的百分比，每组实验材料统计 20个或更多视野为宜。

2 花粉管生长途径的荧光显微观察

在花粉粒及花粉管的研究中，经常使用荧光显微术。用荧光染料苯胺蓝可以使花粉管壁及花粉管的胼胝质塞染色，而在紫外线或篮紫光下呈鲜黄色或黄绿色。观察被子植物雌蕊中花粉管牛长通常的步骤是：授粉后的雌蕊以 FAA 固定液固定， 5%的氢氧化钾或氢氧化钠离析和透明至适度（ 一般需1h 或更长时间），蒸馏水漂洗 3 次，取适量材料于载玻片上，滴加 1-2 滴苯胺蓝染液（水溶性苯胺蓝 0.lg, 溶于1/30mol/L 磷酸钾溶液 100mL,避光、冷藏保存至近无色。）染色约1h, 加 50%甘油 1 滴，盖上盖玻片，必荌时施以轻压。把这样处理后制作的压片用荧光显微镜进行观察，在篮紫光下雌蕊组织中的花粉管呈现很强的荧光，很便于观察。

另外，在不使用荧光显微镜时，也有只使花粉管染色的方法：授粉后的雌蕊在酒精－三氯甲烧－醋酸 (3：4：1)溶液中固定 30min, 在 70%酒精、 50%酒精、 30%酒精、蒸馏水中逐一浸泡 2min 后取出，用苯胺蓝－藏红 O 染液（水溶性苯胺蓝 0.75g, 藏红 00.25g, 溶于加热的 45%醋酸，过滤）染色，然后，在 45%醋酸溶液中透明 1 h, 以乳酸酚封片。于显微镜下观察，花柱组织染成极浅的紫色，而花粉管染成深蓝色，容易区分。