3）于0℃以5000g离心10分钟沉淀RNA，弃上清，用含0.1mol/L 乙酸钠（pH5.2）的70％乙酸洗涤沉淀，用自动微量移液器尽可能将乙醇吸尽， 随后于室温放置几分钟，晾干沉淀。切勿抽干沉淀，因为干的核酸沉淀很难溶解。
4）每个直径为90mm的培养皿或每107细胞加 200μl 50mmol/L Tris.Cl( pH7.8)1mmol/L EDTA(pH8.0)溶液重溶沉淀。
5）分别按 10mmol/L和0.1mmol/L的深度加MgCl2和二硫苏糖醇（DTT），然后分别按1000单位/或10mmol/L 的终深度加台盘RNA酶抑制剂或氧钒核苷复合物。
6）加入无RNA酶的胰DNA酶I至终浓度为2μg/ml，混匀，于37℃温育60分钟。
7）分别按 10mmol/L和0.2％的终浓度加EDTA和SDS。
8）用等体积酚：氯仿抽提1次。
9）于室温以5000g离心10分钟使水相与有机相分相， 将水相吸至另一个离心管内，加3mol/L乙酸钠（pH5.2）至终浓度为0.3mol/L，加2.5倍体积用冰预次的乙醇，充分混匀，冰浴放置2小时。
10）用微量离心机于4℃以12 000g离心5分钟沉淀RNA。
11）吸出所有的乙醇，将打开管盖的离心管在实验台放置几分钟，让最后残存的痕量乙醇挥发干净。
12）用200μl TE（pH7.6）重溶沉淀，加500μl乙醇，于－70 ℃贮存备用。回收DNA时，只须取出1小份贮存液，加入3mol/L乙酸钠（pH5.2 ）至终浓度为0.3mol/L，充分混匀，用微量离心机于4℃以12 000g 离心5分钟即可。
三、注意事项
1．测定最终所得溶液的OD260值可以确定RNA的浓度。取10μl乙醇/TE混合液[步骤13）] 离心沉淀RNA，以400水重溶， 测定OD260 值， OD260＝1的RNA溶液每毫升约含40μg RNA。
2.如果需要，可用 oligo(dT) －纤维素层析法从所制备的细胞总RNA中纯化无寡脱氧核糖核苷酸污染的mRNA或购买试剂盒进行mRNA的纯化。
3.某些情况下（例如从感染了DNA病毒或用DNA转染的细胞中制备RNA时），必须从细胞总RNA中去除寡脱氧核核苷酸。否则，当用这种RNA构建cDNA库或进行引物延伸反应时应会出问题，
反转录过程中法染的模板DNA片段可能会与RNA杂交而充当引物，从而导致物定mRNA5’末端定位的错误或产生截短的 cDNA克隆。
a）步骤12后，加200μl 3mol/L乙酸钠（pH5.2），用自动微量移液器反复吹吸，以重悬核酸沉淀，将悬浮液移至另一个灭菌的微量离心管内。
b）用微量离心机于室温以12 000g离心10分钟，RNA沉于管底，而绝大部分寡脱氧核糖核苷酸仍在上清中。
c）弃上清液，用200μl TE（pH7.6）重溶沉淀。加入20μl
3mol/L乙酸钠（pH5.2），分混匀，加入550μl用冰预冷的乙醇。混匀溶液， 在冰上骤冷30分钟。用微量离心机于4℃以12
000g离主10分钟，以回收RNA。小心吸出上清。d）弃上清液，用 300μl TE（pH7.6）重溶沉淀，加1ml乙醇，－70℃贮存备用。
回收RNA时，只需取出1小份贮存液，加3mol乙酸钠（pH5.2 ）至终浓度为0.3mol/L充分混匀，用微量离心机于4℃以12
000g离心5分钟即可。如需去除氧钒核糖核苷复合物，用含0.1％羟喹啉的苯酚[用0.01mol/L
Tris.Cl(pH7.8)平衡]将RNA终溶液抽提数次即可。
4. 对大多数细胞株来说， 一个直径 90mm 培养甲中培养的RNA收率为100-200μg