光学显微镜的使用、植物细胞有丝分裂的制片和观察(2)

（三）固定

用蒸馏水洗净材料，再用卡诺固定液（用量应为材料体积的15倍以上）室温下固定30~60分钟。固定的材料如暂不制片，可经90％酒精→80％酒精→70％酒精（各半小时）浸泡进行转换，最后置于70％酒精内放入0~4℃冰箱，约可保存半年。如保存时间太长，需重新固定后再用。

（四）解离

根尖、茎尖等体细胞需经处理，除去细胞间的果胶层，并使细胞壁软化，才便于压片。这种处理过程称为解离，解离时间的长短依植物材料和解离液的不同而不同。时间短细胞不易压散，时间过长，细胞被压破，且影响染色效果。

取材料的根尖，在生长点处切取1毫米左右（一般一个根尖可取4~5段），放入1N HCl酸解10分钟左右，取出，用水漂洗三遍。

注：1N HCl由36%~38%浓盐酸取83ml定容至1升配置而成。

（五）制片

选取已处理过的根尖一枚，放在干净载玻片中央，除去非分生组织的部分，并吸去多余水分。另取一张干净载玻片，呈十字形交叉盖在有根尖的载玻片上，用大拇指按压在载玻片的中央，使根尖压成一簿层，然后将两载玻片分开，各滴一小滴染色液进行染色，稍等片刻，取一盖玻片，盖玻片一边靠在离材料不远的载玻片上，左手握镊子顶着盖玻片，右手握解剖针托住盖玻片徐徐放下，若染色液不能布满盖玻片时，可在盖玻片边缘稍加染色液，然后用一张大小合适的滤纸覆盖在盖玻片上，一手固定盖玻片，另一手持铅笔橡皮头，对准材料轻敲，使根尖细胞分散均匀。制好的片子若不能及时进行显微镜观察，可用矾士林临时封住盖玻片四周。

（六）观察

制备好的细胞学片子，置于显微镜的载物台上，先用低倍镜（10×10）调焦观察，寻找到具有分裂相的细胞后，再转换到高倍镜（10×40）下观察。

七、显微镜使用注意事项

1.取显微镜时必须右手握镜臂，左手托镜座，严禁单手提镜，勿使镜体倾斜，防止目镜从镜简中滑出或碰撞显微镜。

2.注意姿势。将显微镜平稳地放在自己左侧的适当地方，镜臂向着自己，镜检者姿势要端正。一般用左眼观察，右眼便于绘图或记录。两眼必须同时睁开，以减少疲劳。

3.将镜台向上调节时，须从侧面观察，以防压碎标本玻片或损坏物镜镜头。

4.一般情况下观察标本均要加盖盖玻片，切忌水、洒精或其它药品浸损镜头或镜台。观察标本时，必须按低倍镜——高倍镜的顺序进行。

5.显微镜各部要保持清洁，光学部分必须用镜头纸擦试，绝对禁止用其它物品擦试。其它部分可用纱布轻轻擦试。

7.观察、绘图时应双眼同时张开，以便在观察的同时绘图。

8. 使用显微镜时一定严格按规程操作，遇到问题，如机件不灵，千万不可用力转动，切忌任意拆修，应立即报告指导教师。

9.使用完毕要将显微镜擦试干净，恢复原状，转动物镜转换器，将4×物镜转到光路上，使镜台调至接近物镜。

10.关闭光圈、电源，适当下降聚光镜，将塑料罩罩好，及时收回镜箱。