pcr的特异性检测和敏感性检测要怎么做

pcr灵敏度检测

1.1   样本准备：以4次方国家一级或者二级标准品为基础样本，用阴性血清进行倍比稀释，稀释后的样本浓度分别为1000IU/ml、500IU/ml、250IU/ml、125IU/ml、100IU/ml、50IU/ml、25IU/ml，每份样本使用1000μl进行检测。

1.2   用质检合格核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)进行检测，每个浓度每批次试剂盒做5个复管，分析各浓度标本的检出率（即阳性率）。以标本浓度值对数为横坐标，对应的检出率为纵坐标描点，用Origin的Sigmoidal Fit 的方法拟合成曲线，根据软件给出的曲线公式计算出当检出率为95%时所对应的浓度，此浓度即为本试剂盒对HBV标本的分析灵敏度。

pcr特异性检测

2.1   参考样本选择：选择与目的片段相近或者感染方式相似的其他病毒或者细菌高载量样本，同时应满足临床或者其他方法确认目的片段为阴性，做5个副管扩增并且全部为阴性。以乙肝为例：选择高载量HCV、CMV、EBV、HSV2的阳性标本各1个（乙肝表面抗原为阴性）,分别检测乙肝表面抗原及乙肝核酸量。每个测5次，全部阴性或者在参考范围以下为特异性良好。