分离原理是根据被分离的组分在流动相和固定相中溶解度不同而分离，分离过程是一个分配平衡过程。
高效液相色谱主要有4种，下面分别描述一下。
1、液-固吸附色谱。固定相是固体吸附剂，它是根据物质在固定相是吸附作用差异来分离的。吸附作用越强，K值越大保留时间越长。
2、液-液分配色谱。顾名思义，它是将固定液涂在担体上作为固定相的，它的分离原理与液液萃取的原理相同，从而服从分配定律。在固定液中溶解度大，K值大，保留时间长
3、离子交换色谱。是离子交换树脂上可电离的离子与具有相同电荷的被测离子可逆交换，由于被测离子在不同交换剂上具有不同的亲和力而使子分离，亲和力越强，K值越大保留时间越长。
4、排阻色谱。固定相是多孔凝胶，内布孔隙，分子大于孔隙的不能进入固定相，直接从表面流过，几乎没有保留，小分子的物质可自由进出孔隙完全不受排阻，保留时间长。中等体积的分子介于两种情况之间。分离顺序只与分子的尺寸有关。
对于反相色谱，极性越小的物质，流动相的极性越大，保留时间越长。极性越小的物质，流动相的极性越小，保留时间越短。对于极性大的物质来说，流动相的极性对其保留时间影响较小，而正相色谱正好相反。
高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography \ HPLC）又称“高压液相色谱”、“高速液相色谱”、“高分离度液相色谱”、“近代柱色谱”等。
高效液相色谱是色谱法的一个重要分支，以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。该方法已成为化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中重要的分离分析技术应用。