发布时间:2022-07-29 09:31 原文链接: 定量蛋白质组学的诞生

  在现代研究技术,如荧光显微镜,流式细胞仪和蛋白质芯片技术中,抗体仍然扮演着非常重要的角色。但依赖于抗体的蛋白质检测存在一些缺点,其中最大的限制就是,抗体的可用性和质量差别很大。一些大规模项目,比如人类蛋白质图谱(Human Protein Atlas),Antibodypedia,以及美国NIH研究院的Health Protein Capture Reagents Program等,都在通过分析人类蛋白靶标有关的抗体的系统生发和特征,来寻找解决这些问题的方法。

  不过还有另一条路——质谱,这也许是蛋白组学研究中最熟悉的一种技术了,这种方法能用于特异性分析靶标兴趣蛋白。在最成熟的定向分析技术,也就是选择反应监控技术(selected reaction monitoring,SRM)中,一种称为三重四极杆质谱仪(triple quadrupole)技术的质谱方法能检测到独一无二的特异性肽段,帮助研究人员高灵敏度,可重复性的定量监测这些蛋白。同期Nature Methods杂志的另外一篇“Mass spectrometry–based targeted proteomics”文章,简要介绍了这项技术的总体情况,对比介绍了以发现为基础的蛋白质组学分析的定向质谱技术流程,作为一种入门材料,值得一看。

  定向蛋白质组的核心是利用串联四级杆质谱特有的MRM扫描方式来定向检测蛋白质,通过软件计算要检测蛋白质的肽对应的母子离子对,用串联四级杆质谱进行MRM扫描,得到MRM色谱峰,一般还会进行MSMS扫描,以对这些肽的MRM进行序列确认,或利用 MSMS进行定性和翻译后修饰位点检测等。