发布时间:2022-10-20 15:36 原文链接: 融合基因的制备方法介绍

1、进行目的基因的克隆:根据基因序列互补原则,设计合适的引物序列,以cDNA为模板,利用PCR技术扩增不同的目的DNA片段。

2、在载体中进行重组:通过限制内切酶将两个DNA片段进行酶切并回收,然后通过连接酶将两个具有相同末端酶切位点的基因片段进行体外连接,并克隆到高表达质粒载体中,构建重组质粒。

3、将重组表达载体转染宿主细胞并利用选择标志进行筛选及测序。

4、融合基因的诱导表达及表达蛋白的纯化 。