什么是内标法

内标法在色谱分析中是一种常用的定量分析法。它尤其广泛的应用于高压液相色谱中。这种方法可以抵消仪器和过程带来的误差。 将一定量的某种纯物质，作为内标物加入到已知重量的样品中，进行色谱分析，内标物在色谱图上得到分离的峰。根据已知含量的内标物的峰面积和样品的峰面积，计算组分的百分含量。只要主要组分能被分离和能被检测就可使用这个方法，一些次要组分成为重叠峰或者对检测器无响应就可以允许存在。不过，内标物的选择要符合以下要求：（1）内标物的峰与组分峰能完全分离（2）内标物峰在色谱图上出现的位置，最好在欲定量组分峰的邻近位置。如果样品中有几个组分需要定量，并且他们的k’之差别较大，这时就需要用几个内标物来作定量测定。（3）内标物的性质和浓度尽量与预测定峰的接近。（4）内标物是样品中不存在的，与样品各组分、柱填料和移动相不发生化学反应。 根据组分百分含量与其色谱峰面积成正比的关系进行计算：式中，Pi、fi、Ai和Ps、fs、As分别为组分i和内标物的含量百分比、相对校正因子和峰面积。将两式相除，得： 假设我们以内标物的相对校正因子作为这些组分相对校正因子的标准，即所有的组分的校正因子都是相对于内标物的，即fs = 1其中是已知的，将组分i的标准物与内标物配成溶液接近的二元混合物，进行色谱分离，将测得峰面积以及已知的浓度代入（8）式中，求得fi，最后根据（7）式计算分析样品中组分i的百分含量。 有（8）式我们还可以看出，对于一定的样品组分和内标物组成的溶液，当内标物在混合溶液中的含量相同时，样品组分在溶液中的含量与组分峰面积和内标物峰面积之比成正比。因此，我们可以将样品组分标准物与内标物之成数分内标物含量相等的、样品组分含量不同的溶液。将他们分别进样后，得到一系列相应的Ai和As。每组Ai/As值对相应的样品组分含量Pi作图，得带一条外推可通过坐标原点的直线。 同时将样品和内标物配制成与上述组分标准物有相同内标物含量的溶液，在相同的操作条件进样后，从色谱图上得到此溶液中组分i与内标物s的峰面积比Ai/As。将其与上述方法绘制的标准校正曲线作对照，从与此Ai/As相对应的点即可求得组分i在样品中的含量。 内标法特别适用于只需要比较准确的测定样品中一两个峰的情况。结果小心地测定校正因子或绘制标准校正曲线，这个方法的精密度最好可达0.1%。 这个方法的不足之处是增加了一个内标物，是分离的难度增大，对于组成复杂的样品，分离更为困难。另外，每次测定都需要准确的称量，操作麻烦，难以适应快速的中间控制分析。 内标法亦可用峰高进行计算，但与外标法一样，要求操作条件十分稳定