第三届全国生物质谱学术交流会隆重召开

发布时间：2010-05-16 06:26 原文链接：第三届全国生物质谱学术交流会隆重召开

　　2010年5月15日上午10时许，由中国生物化学与分析生物学会蛋白质组学专业委员会、中国质谱学会生物质谱专业委员会和中国化学会分析化学委员会主办，北京蛋白质组研究中心、复旦大学合蛋白质组学国家重点实验室承办的，蛋白质组数据处理暨第三届全国生物质谱学术交流会在美丽的云南丽江古城盛大开幕。来自全国高等院校、科研机构、企事业单位的200余名从事蛋白质组学及其相关研究的专家学者出席了本次会议。

蛋白质组数据处理暨第三届全国生物质谱学术交流会现场

北京蛋白质组学研究中心钱小红研究员

　　本会会议主要围绕蛋白质组学技术与应用、数据挖掘和生物质谱等方面的现状和进展进行广泛的交流和深入的探讨。大会开幕式由北京蛋白质组学研究中心钱小红研究员主持，出席开幕式的领导和专家有：中科院大连化学物理研究所张玉奎院士，复旦大学杨芃原教授，美国加州大学心血管研究中心Ping Peipei教授，军事医学科学院二所科技处王东根处长。

复旦大学杨芃原教授

　　杨芃原教授作为此次大会主席在致辞中说到，第一届生物质谱研讨会在复旦大学举办，第二届生物质谱研讨会于2002年在军事医学科学院举办。时隔8年，今天第三届生物质谱会议在美丽的云南丽江召开。在2009年第六届中国蛋白质组学大会期间，蛋白质组学专业委员会理事会议通过决定，将中国蛋白质组学大会由每年一届改为每两年一届，中间年举办研讨会，本次会议为专题研讨会的首次尝试。

　　近年来，生物质谱技术飞速发展，其应用范围不断扩大，而生物质谱技术在生命科学领域的应用，为蛋白质组研究发展注入了新的活力。随着质谱的灵敏度、精确度、以及高通量的不断发展，质谱在蛋白质组学中扮演着越来越重要的角色。杨教授指出就在开幕式之前举行的973研讨会上，各位专家对高精度质谱数据处理中的一些问题展开了探讨。

　　杨教授最后指出，本次大会邀请了多位蛋白质组学领域的著名专家与会，相信一定能够为我们带来精彩的报告。并预祝在大会组委会、学术委员会和大会秘书处的共同努力下，在全体参会代表的大力支持下，此次学术交流会定能取得满意的成果。

军事医学科学院二所科技处王东根处长

美国加州大学心血管研究中心 Ping Peipei教授

　　开幕式结束后，大家进行了集体合影。随后多位著名国内外专家和教授做了大会报告，同大家一起探讨了生物质谱技术领域当前的发展趋势和最新研究成果，分别如下：

中科院大连化学物理研究所张玉奎院士

　　首先，由来自中科院大连化学物理研究所的张玉奎院士做了题为《蛋白质组研究分离和鉴定技术进展》的报告。报告中，张院士主要向大家介绍了该研究所在近年来发展的多种蛋白质组分离鉴定的新技术与新方法。

　　在高丰度蛋白质去除方面，发展了基于多维阵列液相色谱的通用型高丰度蛋白质去除技术；一次运行可去除58种高丰度蛋白质，并将样品中蛋白质的鉴定数目提高2倍以上。此外，还发展了基于蛋白质印迹材料的高丰度蛋白质选择性去除技术，如分级印迹技术。

　　在低丰度蛋白质富集方面，研制了多种固载金属亲和色谱材料，包括无机有机杂化整体材料、聚合物颗粒和介孔材料，以及金属氧化物气溶胶和复合金属氧化物微球，实现了磷酸化肽的高选择性富集。此外，在糖肽富集方面，采用点击化学方法，在硅胶表面引入柔性麦芽糖功能基团；富集α-酸性糖蛋白酶解产物中的糖肽，共发现了146条糖肽，原文献报道中仅发现了78条。

　　在高效分离新技术方面，针对蛋白质在基质上的残留问题，研制了亲水性微酶解反应器，实现了蛋白质组的在线快速酶解。通过与样品预处理或在线酶解的集成，使得样品预处理时间从30h缩短到7min，检测限达6fmol以及5个数量级的动态范围，不仅提高了系统的分析通量，而且提高了蛋白质鉴定的可靠性。同时还建立了阵列多维高效液相色谱、多维毛细管电泳和多维芯片毛细管电泳的分离方法。

　　在质谱高灵敏度鉴定方面，合成了新型磁性微纳米材料，包括介孔涂层磁球、C8功能化介孔磁球等，提高了基体辅助激光解吸离子化质谱对蛋白质鉴定灵敏度。发展了针对磷酸化肽的衍生技术，可不经过富集，直接实现磷酸化肽的高灵敏度鉴定。

　　张院士最后指出，在定量蛋白质组学研究，功能蛋白质组学研究，蛋白质时空变化、结构鉴定和功能研究等方面的新技术与新方法，以及自主知识产权的新装置、新仪器的研制都是未来蛋白质组学研究发展的方向。

Prof. Hisashi Narimatsu, Research Center for Medical Glycoscience, National Institute of Advanced Industrial Science and Technology, Japan

Title: Development of glyco-biomarkers for liver fibrosis, and liver cancers and others using newly developed technologies for Glycomics

中国科学院北京基因组研究所刘斯奇研究员

　　中国科学院北京基因组研究所的刘斯奇研究员向大家介绍了《基于质谱的线粒体GST蛋白质组定性和定量分析》的报告。

　　刘老师介绍说到谷胱甘肽转移酶(Glutathione S-transferases ，GSTs)是解毒酶的主要总科，可以通过还原型谷胱甘肽有效转移亲核化合物。然而，GSTs在糖尿病中的参与机理很少有人阐明。原因是缺少对GSTs线粒体的系统理解。刘老师首次提出了“线粒体GSTs蛋白质组”的概念，通过一种组合的方式，系统地研究了属肝线粒体中的GSTs。采用亲和色谱法或SDS-PAGE富集GST蛋白，使用MALDI Tof/Tof MS 或LC tandem MS/MS鉴别蛋白，研究结果表明，属肝线粒体中存在5种GSTs，分别为GSTA3, GSTM1, GSTP1, GSTK1 以及GSTZ1。

　　为了对线粒体GSTs的相对丰度进行定量分析，采用了质谱结合免疫印迹的综合分析方法。利用质谱对GSTs进行定性分析时，根据质谱谱图的多反应监测(MRM)推断GSTs结构。使用重组的GST蛋白作为标准物，建立了蛋白浓缩物的线性回归方程和胰蛋白酶GST多肽的MS/MS强度，同时，通过校准估算出了鼠肝线粒体中的GSTs含量。在5中线粒体GSTs中，GSTP1含量最高，GSTZ1含量最少。通过对特定GSTs抗体的强度识别，使用免疫印迹对GSTs进行了定量分析。获得了GST重组蛋白的5种单克隆抗体，将其用于GST浓度校准和免疫印迹强度分析。通过免疫印迹分析获得的定性分析结果基本与MRM数据获得的结果一致。

Prof. Hookeun Lee, Gachon University of Medicine and Science, Korea

Title: Mass Spectrometric Quantitative Proteomic Analysis: Roles of Microcapillary Liquid Chromatography

　　复旦大学张祥民教授

　　来自复旦大学的张祥民教授为大家带来了题为《蛋白质水平的色谱分离与生物质谱鉴定新方法研究》的报告。

　　张教授所在课题组通过对液相色谱分离系统的优化，在实际蛋白质样品考察优化了系统的分离性能，构建了液相色谱分离蛋白质鉴定方法与平台。研制了蛋白水平富集预柱，并将其应用于蛋白质捕集。在离子交换色谱柱和反向色谱优化选择上，实现了蛋白质分析所需的高分辨分离。色谱分离组分点样至靶板上，利用发展的快速酶解技术完成蛋白质酶解，再通过MALDI-TOFTOFMS或LC-LTQMS进行蛋白质鉴定。该方法使得蛋白质的理论分离能力达到5000个以上，蛋白质组分能够得到浓度信息，质谱鉴定可以同时利用肽指纹图谱PMFs信息和串级序列信息，使得蛋白质鉴定的可靠性大为提高。

　　中国科学院大连化学物理研究所张丽华研究员

　　中国科学院大连化学物理研究所的张丽华研究员为大家介绍了有关《基于离子液体的新型膜蛋白质组预处理及分离鉴定技术》的报告。

　　张老师首先指出由于膜蛋白质，尤其是具有多个跨膜区的跨膜蛋白质，具有疏水性强、溶解性差、易沉淀、难酶解、含量低等特点，因此在采用通常用于可溶性蛋白质组分离鉴定的方法对膜蛋白质组进行研究时遇到了很大的挑战。

　　张老师所在可以租发展了一种基于离子液体的膜蛋白质样品处理方法，该方法具备对膜蛋白溶解能力强、与酶的生物相容性好、热稳定性高以及质谱鉴定前容易去初等优势。通过对鼠脑膜蛋白和人肝微粒体组分蛋白质表达谱的分析结果表明，离子液体不仅可以提高膜蛋白的溶解性，而且不用影响后续酶解过程中酶的活性。此外，在样品进入质谱鉴定前，易于在除盐步骤去除，不会影响质谱鉴定。与其他膜蛋白质组研究中常用的增溶剂相比，离子液体在膜蛋白质组样品预处理中表现出明显的优势。

　　军事医学科学院放射与辐射医学研究所张养军副研究员

　　来自军事医学科学院放射与辐射医学研究所的张养军副研究员为大家介绍了关于《多层键合磷酸锆开管毛细管柱的制备及及其在磷酸肽富集分析中的应用》的报告。

　　张老师在报告中主要介绍了一种利用键合磷酸锆开管毛细管柱的制备及用于快速富集磷酸肽的新方法。对该多层开关毛细管柱的富集条件的优化结果表明，当开管柱长度为50 cm时，标准磷酸肽的进样流速在0.3μL/min -0.5μL/min时，均有很好的富集效果。并且在同样的流速条件下，使用不同内径的多层开管柱进行富集时，富集效果没有显著性差异。该富集方法对磷酸肽有较高的选择性，且检测限达到10^-9M。

　　陆豪杰教授复旦大学

　　题目：糖蛋白组的富集和定量新技术

晏光荣副研究员暨南大学生命与健康工程研究院

题目：基于质谱技术的天然产物genistein调控的抑癌磷酸化信号通路构建

中国科学院生物物理研究所杨福全研究员

　　来自中国科学院生物物理研究所的杨福全研究员为大家带来了题为《C18预分离和TiO2富集在蛋白质磷酸化研究中的应用》报告。

　　杨老师指出该研究利用反相C18色谱分离作为蛋白质酶解肽段的预分离方法，有效地提高了IMAC- TiO2磷酸化肽段富集方法的效率。采用该策略结合2D-LC-MS/MS多维蛋白质鉴定技术，对大鼠L6肌管细胞的磷酸化蛋白质组进行了鉴定分析，一共得到超过2200个磷酸化肽段，既证实了反相C18色谱可以作为一种预分离方法来提高磷酸化肽段的富集效率，同时这也代表了目前最大规模的肌管细胞磷酸化蛋白质组的分析。

　　此外，利用反转数据检索的策略，在已有的SEQUEST检索打分值的基础上，引入了磷酸化肽段MS/MS质谱图的基峰强度和磷酸化肽段的保留时间作为数据筛选的参数，提高了鉴定结果的可靠性。

李岩博士美国约翰霍普金斯大学

　　题目：应用糖蛋白质组学和糖组学的方法筛选癌症分子标记物

上海交通大学系统生物医学研究院张延研究员

　　来自上海交通大学系统生物医学研究院的张延研究员介绍了有关《蛋白质的O-糖基化修饰研究》的报告。

　　张老师首先指出糖链修饰是一种重要的蛋白质翻译后修饰，细胞内50%以上的蛋白质都有糖链修饰。糖链参与了细胞识别、细胞分化、发育、信号传导、免疫应答等各种重要生命活动。人类重大疾病如神经退行性疾病、心血管疾病、代谢性疾病、免疫性疾病以及肿瘤等均伴随有蛋白质糖基化异常的发生。因此蛋白质的糖基化修饰研究是蛋白质组学研究的重要内容。张老师主要通过研究 O-GalNAc糖基转移酶的糖基化修饰特性，通过利用UDP-GalNAc衍生物糖探针的荧光标记技术，结合质谱及多肽蛋白质芯片技术，建立了一种高通量发现蛋白质O-糖基化的新策略。

南京大学化学化工学院梁靓老师

　　来自南京大学化学化工学院的梁靓老师介绍了题为《用于糖蛋白富集的团队硼亲和方法研究》的报告。

　　目前用于糖蛋白富集的主要方法有凝集素亲和法、肼化学法、亲水作用色谱法和硼亲和色谱法等。硼亲和方法与其他几种方法相比较具有三个显著的优点：1)共价结合，专一性好，亲和力强；2)可逆反应，结合/解吸过程容易控制；3)在酸性条件下解吸，解吸条件的质谱兼容性好。这些优点使得取代硼酸是非常理想的亲和配基，特别适合于以质谱为核心的蛋白质组学分析方法。然而，常规的取代硼酸具有两个明显的缺点：1)在中性pH下的亲和能力极弱，必须在碱性pH下才能与顺式二羟基化合物结合，这造成了操作上的不便，增加了样品变性的危险；2)在碱性pH时取代硼酸带负电，与样品及样品基体间存在静电相互作用，因而导致专一性的下降。

　　为了同时解决以上两个问题，梁老师所在课题组提出了“团队硼亲和”的原理以及相应的方法。利用该方法制备了团队硼亲和磁性纳米颗粒和团队硼亲和MALDI靶板，其优异的亲和力和专一性得到验证，成功实现了在中性pH条件下对糖蛋白的专一性富集和纯化。