q225荧光定量PCR仪高级热循环设置功能详解

今天要给大家详细讲一讲高级热循环设置(Advanced Cycling)功能的使用方法。

q225默认的热循环程序模板，支持最多6个步骤和100个循环，足够满足绝大部分用户的使用需求。但是一些应用中，可能需要前几个循环设置不同的反应条件，例如样本为gDNA时升高前几个循环的解链温度，或为提高扩增特异性而升高前几个循环的退火温度等。这时候可以使用q225软件中的高级热循环设置功能。

后文的设置说明将以如下热循环程序为例：第1-5个循环：98 ℃ 10s，65 ℃ 30s；

第6-40个循环：95 ℃ 5s，60 ℃ 15s。

第一步 启动高级热循环设置功能

在q225操作软件菜单中选择

温度配置—》高级热循环设置

打开后弹出高级热循环设置对话框

勾选启用高级热循环设置

 
第二步 设置第1组循环

在左侧的编辑区域输入第1组循环，例如：

循环步骤数为2；

第一步解链：98 ℃ 10s；

第二步退火+延伸：65 ℃ 30s；

循环数为5；

在第2步采集荧光信号。

完成后点击应用

 
第3步 加入第2组循环

单击 插入 按钮，增加一组新的循环

在左侧的编辑区域输入第2组循环：

循环步骤数为2；

第一步解链：95 ℃ 5s；

第二步退火+延伸：60 ℃ 15s；

循环数为35；

在第2步采集荧光信号。

完成后点击应用

 
第4步 查看和编辑

在右侧的表格中可以看到每一组热循环的详细配置

通过单击左侧的 插入 删除 按钮，来新增和删除组

通过单击右侧表格，或者单击左侧组名两边的箭头，来切换当前编辑的温度组。

编辑完成后不要忘记点击 应用 按钮 使得更改生效哈

完成全部设置后，点击 确认 按钮

第5步 开始实验

返回主界面，可以看到原本设置循环温度和时间的区域，已经提示启用了高级热循环设置。

接下来就可以正常开始实验啦~

高级热循环功能

• 最多支持10组循环

• 每组循环支持最多6个步骤，循环数最多100

• 即总共支持最多1000个循环

另一种选择

如果在40个循环前，想要额外增加3个循环进行预扩增，预扩增阶段的温度设置与循环阶段的温度设置不同，且预扩增阶段不采集荧光（不参与Ct值计算）。

此时可以考虑在循环前步骤中开启循环功能

勾选 循环前 框中的 开启循环 选项

 
例如需要设置的温度参数为

热激活：95 ℃ 60s；

预扩增循环：3个循环，不采集荧光信号，98 ℃ 20s，65 ℃ 30s；

扩增循环：40个循环，95 ℃ 5s，60 ℃ 15s， 采集荧光。

则按照上图进行设置，在开启循环下方，设置循环步骤为2-3，共3循环。

上述两个功能默认不开启，如有需要请联系技术支持为您开启。