色谱期刊：一种测定洛伐他汀的绝对淌度和解离常数方法

　　色谱, 2021, 39(12): 1362-1367

　　DOI: 10.3724/SP.J.1123.2021.01014

　　罗芳, 郭泽华, 曹成喜, 樊柳荫*, 张薇*

基于毛细管电泳和离子迁移率经验公式测定洛伐他汀的绝对淌度和解离常数

　　近年来,生物化学工程的迅速发展使得大量化合物成为潜在候选药物,了解这些化合物理化性质的需求也日益增长。这也对如绝对淌度(m0, m2/(V·s))和解离常数(pKa)等理化参数的测定方法提出了更高要求。其中,m0指化合物在离子强度趋于零的条件下的淌度,而pKa是水溶液中具有一定解离度的溶质的极性参数。

　　洛伐他汀是胆固醇合成通路中重要酶羟甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMG-CoA还原酶)的抑制剂,可减少血胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇的含量,预防动脉粥样硬化和冠心病等。洛伐他汀的最大吸收波长λmax为238 nm,可溶于碱性溶液。洛伐他汀包括内酯型和酸型,而内酯型洛伐他汀的亲脂性较强,口服吸收率低,须在肝脏中水解成酸型后才能发挥药理作用。

内酯洛伐他汀和酸性洛伐他汀的结构

　　当环境pH值高于7.7时,内酯型洛伐他汀转化为酸型洛伐他汀。因而有必要对洛伐他汀的重要理化参数进行测定,了解其理化特性,从而为更深入的研究提供基本数据和信息。但是,目前大多数对洛伐他汀药物的研究工作主要聚焦于含量测定、作用机理和功能方面,关于测定洛伐他汀m0和pKa值的研究则较少。

　　当前已经有许多关于其他化合物pKa值的测定方法,其中最经典的方法是电位计滴定法和光谱法。但这些方法相对来说需要耗费大量样品,并且对于纯度低的化合物测定结果不够准确。自20世纪70年代以来,高效液相色谱法(HPLC)也已应用于化合物pKa的测定中。Bartolini等使用反相高效液相色谱法(RP-HPLC)测定乙酰胺的pKa,但液相色谱方法流动相溶液消耗较多,而且单个样品分析时间至少10 min以上,比较耗时。包括毛细管等速电泳法(ITP)和毛细管区带电泳法(CZE)等在内的毛细管电泳法(CE)也广泛应用于水溶性化合物pKa值的测定中。

　　本研究基于CZE和离子淌度的经验方程,建立了一种精确测定洛伐他汀m0和pKa的新方法。在前期相关研究基础上,提出了一种基于毛细管区带电泳(CZE)和离子淌度经验公式测定洛伐他汀m0和pKa的新方法。

　　首先,根据经验公式由实际淌度(mact)、有效淌度(meff)和m0之间的关系推导出m0的计算公式。对于一元酸HA,根据之前m0的计算公式,以氢离子的浓度为自变量,meff的倒数为因变量可得到一条直线。根据这条直线的斜率计算得到pKa。

　　为了验证该方法的可行性和可靠性,应用该方法测定了巴比妥酸、苯甲酸、苄胺、苯酚、间甲酚等有机酸碱的m0和pKa值。同时,对于pH值低于6的缓冲体系,采用反向毛细管电泳技术,测定其pKa,并将测得的实验结果与理论参考值进行对比,发现两者具有较高的一致性,m0的标准偏差小于6.0%, pKa的标准偏差小于6.2%,且由线性回归方程的相关系数(R)可以看出测定pKa时的线性回归直线拟合度较好,说明建立的新方法具有较高的可靠性。

　　最后基于这种CZE与经验公式结合的新方法,采用二甲基亚砜(DMSO)作为电渗流标记物测定了洛伐他汀的m0和pKa,得到的值分别为-1.70×10-8 m2/(V·s)和9.00。该方法适用于酸性和碱性分析物m0和pKa等理化参数的测定,在药物分析尤其是新药理化特性研究中具有重要意义。