实验室常用缓冲液、试剂的配制方法

　　 #1 M Tris-HCl (pH7.4, 7.6, 8.0)#

　　组份浓度：1 M Tris-HCl

　　配制量：1 L

　　配制方法：

　　1. 称量121.1 g Tris置于1 L烧杯中。

　　2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。

　　3. 按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。

　　4. 将溶液定容至1 L。

　　5. 高温高压灭菌后，室温保存。

　　注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。

　　#10&timeTE Buffer (pH7.4, 7.6, 8.0)#

　　组份浓度：100 mM Tris-HCl, 10 mM EDTA

　　配制量：1 L

　　配制方法：

　　1. 量取下列溶液，置于1 L烧杯中。

　　2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水，均匀混合。

　　3. 将溶液定容至1 L后，高温高压灭菌。

　　4. 室温保存。

　　#1.5 M Tris-HCl (pH8.8)#

　　组份浓度：1.5 M Tris-HCl

　　配制量：1 L

　　配制方法：

　　1. 称量181.7 g Tris置于1 L烧杯中。

　　2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。

　　3. 用浓盐酸调节pH值至8.8。

　　4. 将溶液定容至1 L。

　　5. 高温高压灭菌后，室温保存。

　　注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。

　　#3 M 醋酸钠(pH5.2)#

　　组份浓度：3M 醋酸钠

　　配制量：100ml

　　配制方法：

　　1.称量40.8g NaAc·3H2O置于100-200ml烧杯中，加入月40ml的去离子水搅拌溶解

　　2.加入冰醋酸调节pH值至5.2

　　3.加去离子水将溶液定容至100ml

　　4高温高压灭菌后，室温保存。

　　#Buffer#

　　组份浓度：137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 2 mM KH2PO4

　　配制量：1 L

　　配制方法：

　　1. 称量下列试剂，置于1 L烧杯中。

　　2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。

　　3. 滴加浓盐酸将pH值调节至7.4，然后加入去离子水将溶液定容至1 L。

　　4. 高温高压灭菌后，室温保存。

　　注意：上述 Buffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充1 mM CaCl2和0.5 mM MgCl2。

　　#10 M 醋酸铵#

　　组份浓度：10 M 醋酸铵

　　配制量：100 ml

　　配制方法：

　　1. 称量77.1 g醋酸铵置于100～200 ml烧杯中，加入约30 ml的去离子水搅拌溶解。

　　2. 加去离子水将溶液定容至100 ml。

　　3. 使用0.22 mm滤膜过滤除菌。

　　4. 密封瓶口于室温保存。

　　注意：醋酸铵受热易分解，所以不能高温高压灭菌。

　　#Tris-HCl平衡苯酚#

　　配制方法：

　　1. 使用原料：大多数市售液化苯酚是清亮无色的，无需重蒸馏便可用于分子生物学实验。但有些液化苯酚呈粉红色或黄色，应避免使用。同时也应避免使用结晶苯酚，结晶苯酚必须在160℃对其进行重蒸馏除去诸如醌等氧化产物，这些氧化产物可引起磷酸二酯键的断裂或导致RNA和DNA的交联等。因此，苯酚的质量对DNA、RNA的提取极为重要，我们推荐使用高质量的苯酚进行分子生物学实验。

　　2. 操作注意：苯酚腐蚀性极强，并可引起严重灼伤，操作时应戴手套及防护镜等。所有操作均应在通风橱中进行，与苯酚接触过的皮肤部位应用大量水清洗，并用肥皂和水洗涤，忌用乙醇。

　　3. 苯酚平衡：因为在酸性pH条件下DNA分配于有机相，因此使用苯酚前必须对苯酚进行平衡使其pH值达到7.8以上，苯酚平衡操作方法如下：

　　① 液化苯酚应贮存于-20℃，此时的苯酚呈结晶状态。从冰柜中取出的苯酚首先在室温下放置使其达到室温，然后在68℃水浴中使苯酚充分融解。

　　② 加入羟基喹啉（8-Quinolinol）至终浓度0.1%。该化合物是一种还原剂、RNA酶的不完全抑制剂及金属离子的弱螯合剂，同时因其呈黄色，有助于方便识别有机相。

　　③ 加入等体积的1 M Tris-HCl（pH8.0)，使用磁力搅拌器搅拌15分钟，静置使其充分分层后，除去上层水相。

　　④ 重复操作步骤③。

　　⑤ 加入等体积的0.1 M Tris-HCl（pH8.0)，使用磁力搅拌器搅拌15分钟，静置使其充分分层后，除去上层水相。

　　⑥ 重复操作步骤⑤，稍微残留部分上层水相。

　　⑦ 使用pH试纸确认有机相的pH值大于7.8。

　　⑧ 将苯酚置于棕色玻璃瓶中4℃避光保存。

　　苯酚/氯仿/异戊醇 (25 : 24 : 1)

　　配制方法：

　　1. 说明：从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯酚/氯仿/异戊醇（25 : 24 : 1)。氯仿可使蛋白质变性并有助于液相与有机相的分离，而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现的气泡。

　　2. 配制方法：将Tris-HCl平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇（24 : 1）混合均匀后，移入棕色玻璃瓶中4℃保存。

　　#10% (W/V) SDS#

　　组份浓度：10% (W/V)SDS

　　配制量：100ml

　　配制方法：

　　1.称量10g高纯度的SDS置于100-200ml烧杯中，加入约80ml的去离子水，68℃加入溶解

　　2.滴加浓盐酸调节pH值至7.2

　　3.将溶液定容至100ml后，室温保存。

　　#2 N NaOH#

　　组份浓度：2 N NaOH

　　配制量：100 ml

　　配制方法：

　　1. 量取80 ml去离子水置于100～200 ml塑料烧杯中（NaOH溶解过程中大量放热，有可能使玻璃烧杯炸裂)。

　　2. 称取8 g NaOH小心地逐渐加入到烧杯中，边加边搅拌。

　　3. 待NaOH完全溶解后，用去离子水将溶液体积定容至100 ml。

　　4. 将溶液转移至塑料容器中后，室温保存。

　　#2.5 N HCl#

　　组份浓度：2.5 N HCl

　　配制量：100 ml

　　配制方法：

　　1. 在78.4 ml的去离子水中加入21.6 ml的浓盐酸（11.6 N)，均匀混合。

　　2. 室温保存。

　　#5 M NaCl#

　　组份浓度：5 M NaCl

　　配制量：1 L

　　配制方法：

　　1. 称取292.2 g NaCl置于1 L烧杯中，加入约800 ml的去离子水后搅拌溶解。

　　2. 加去离子水将溶液定容至1 L后，适量分成小份。

　　3. 高温高压灭菌后，4℃保存。

　　#20% (W/V) Glucose#

　　组份浓度：20% (W/V) Glucose

　　配制量：100 ml

　　配制方法：

　　1. 称取20 g Glucose置于100～200 ml烧杯中，加入约80 ml的去离子水后，搅拌溶解。

　　2. 加去离子水将溶液定容至100 ml。

　　3. 高温高压灭菌后，4℃保存。

　　#Solution I(质粒提取用)#

　　组份浓度：25 mM Tris-HCl（pH8.0), 10 mM EDTA, 50 mM Glucose

　　配制量：1 L

　　配制方法：

　　1. 量取下列溶液，置于1 L烧杯中。

　　2. 高温高压灭菌后，4℃保存。

　　3. 使用前每50 ml的Solution I中加入2 ml的RNase A（20 mg/ml)。

　　#Solution II(质粒提取用)#

　　组份浓度：200mM NaOH，1%(W/V)SDS

　　配制量：500ml

　　配制方法：

　　1.量取下列溶液，置于500ml烧杯中

　　10% SD 50ml

　　2N NaOH50ml

　　2.加灭菌水定容至500ml，充分混匀

　　3.室温保存，此溶液保存时间最好不要超过一个月

　　注意：SDS易产生气泡，不要剧烈搅拌

　　#Solution III(质粒提取用)#

　　组份浓度：3 M KOAc, 5 M CH3COOH

　　配制量：500 ml

　　配制方法：

　　1. 称量下列试剂，置于500 ml烧杯中。

　　2. 加入300 ml去离子水后搅拌溶解。

　　3. 加去离子水将溶液定容至500 ml。

　　4. 高温高压灭菌后，4℃保存。

　　#0.5 M EDTA(pH8.0)#

　　组份浓度：0.5 M EDTA

　　配制量：1 L

　　配制方法：

　　1. 称取186.1 g Na2EDTA·2H2O，置于1 L烧杯中。

　　2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌。

　　3. 用NaOH调节pH值至8.0（约20 g NaOH)。

　　注意：pH值至8.0时，EDTA才能完全溶解。

　　4. 加去离子水将溶液定容至1 L。

　　5. 适量分成小份后，高温高压灭菌。

　　6. 室温保存。

　　#1 M DTT#

　　组份浓度：1 M DTT

　　配制量：20 ml

　　配制方法：

　　1. 称取3.09 g DTT，加入到50 ml塑料离心管内。

　　2. 加20 ml的0.01 M NaOAc（pH5.2)，溶解后使用0.22 mm滤器过滤除菌。

　　3. 适量分成小份后，-20℃保存。

　　#10 mM ATP#

　　组份浓度：10 mM ATP

　　配制量：20 ml

　　配制方法：

　　1. 称取121 mg Na2ATmiddot；3H2O，加入到50 ml塑料离心管内。

　　2. 加20 ml的25 mM Tris-HCl（pH8.0)，搅拌溶解。

　　3. 适量分成小份后，-20℃保存。