转膜你用的是湿转的方法吗?湿转速度比较慢,一般的半干转能快点,30-45min转完,现在市面上有很多快速半干转,3-15min可以完成转印,可以在转膜这一步节约一些时间。我还能想到另外一个可以节约时间的部分,就是检测,如果以前压胶片,现在可以考虑用成像仪,这个也可以节省一些时间。至于抗体孵育的时间,得根据具体情况来看,有些也可以不用过夜,室温孵育比较快,但是可能效果就没那么理想了。
VDF膜一定要在纯甲醇里浸润的!不然蛋白结合不上去。在100%甲醇里短暂浸润,其目的是为了活化PVDF膜上面的正电基团,使它更容易跟带负电的蛋白质结合。小分子及大分子量的蛋白转移时,多加或不加甲醇也是......