发布时间:2018-03-13 16:54 原文链接: 液相色谱峰分叉了,怎么办?

液相色谱的同学基本都会碰到分叉峰

很多时候

这都意味着硬件或者方法某些地方可能出现问题

今天我们就一起看看导致峰分叉的原因

以及如何解决这个问题

首先,我们需要判断

这到底是一个峰,还是两个峰?

A图主峰前面有一个肩峰

这到底是峰形不好

还是另外一个化合物没分开呢?

判断方法

降低该成分在样品中的浓度
B图是降低该成分浓度后

进样后得到的色谱图

如果这是一个峰

那肩峰也应该响应变小

但是这个例子里

肩峰没有变小

这应该是另外一个化合物

这时候,我们就要考虑如何改变方法

将这两个东西分开


如果所有峰的峰形都不好
一般来说

一个样品都会出多个峰

峰形不好,绝大多数时候

在每个峰上面都会出现

比如像下面这样:

A图是所有峰都拖尾.
B图是所有峰都有肩峰,

也可以说峰分叉
这种情况一般都是色谱柱头塌陷

或者柱头的筛板被堵导致的


为什么会导致峰形问题呢?

请看下面的图

A图是正常的柱头

B图是筛板被堵的柱头
正常情况下

所有样品分子都是均匀通过色谱柱

形成一个对称的峰形
堵塞的情况下

有一部分样品分子进入色谱柱就会受到阻扰

导致时间拖后,形成拖尾
对于色谱柱塌陷的情况

用同样的方法大家也不难理解

只不过这时候

是一些样品分子可能跑的比正常的快了一些


如何解决这个问题呢?

01

反冲


柱出口放空,

冲20-30ml流动相

虽然柱子上都有表明使用方向,

但是对于硅胶基质的色谱柱

基本都可以反冲。
将柱头污染物

如泵密封圈的碎屑,

样品中的污染等冲走,

就能解决问题。

当然,还是要提倡大家注意

样品上机之前的前处理

和及时更换磨损的泵密封圈。

有条件的还是用保护柱,

大不了就换保护柱,

也比换色谱柱强。


02

更换或清洗筛板


现在估计做这个事情的人不多,

但是谁有废柱子,

想练练也未尝不可。


我们一起看看一个实际的例子:

根据之前说的,

可能是柱头堵了,

或者塌陷了。

但是进一步检查,

发现另有原因。

方法用的150 mm 4.6 mm, 5 um C18 柱子,

78% 乙腈,1.5ml/min,等度方法,

进样10ul,100%乙腈溶解的样品。
一般来说,

虽然10ul的纯乙腈不会引起峰形不好,

但是有时候样品溶剂的极性跟流动相差异较大时,

的确会引起峰形的问题。

我们怎么办呢?

01

从最容易的办法做起,

降低溶剂乙腈的比例,

降到50%看看。

从下图B,4min的峰可以看出,

没啥改观。

02

接下来反冲柱子,

结果如图C,

基本没变化。

算了,明天再说吧。

03

第二天来到实验室

还能干嘛呢?

更换筛板?

算了,直接换柱子吧!

结果如D,

噢,好很多噢。

之前柱子肯定有问题,扔了。

但是峰还是有点宽,

估计还是哪儿有问题。

手上忙,没时间管这个。

04

几天过后,

重新配了流动相,

一跑,好了,如图E。

虽然到底什么原因导致之前峰形的问题,

已经无从查找

(柱子扔了,旧流动相也没了),

但是也给我们提供了一个解决问题的步骤:

1

确定峰形问题

是所有峰都有问题,

还是就是某一个峰有问题。

如果所有峰都有问题,

基本都是色谱柱,

或者仪器管路连接的问题。

如果是某一个峰有问题,

那就要从方法上来考虑,

是否需要改变流动相比例,

pH值,色谱柱温度等等。


色谱柱液相色谱

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