意蜂蜂王浆超氧化物歧化酶的分离纯化及部分性质

摘要: 以意蜂Apis mellifera 蜂王浆为材料,经过硫酸铵分段盐析,DEAE2Sepharose 柱层析和Sephacryl S2200 凝胶过滤,得到纯化的超氧化物歧化酶(SOD) ,纯化倍数104.00 ,比活力53105 UPmg。该SOD 经SDS2PAGE 显示单一蛋白带。温度对该酶活力的影响较小。Cu、Zn、Fe 和Mn 等元素含量测定发现该酶只含有Cu 和Zn。酶经圆二色谱测定后,其α螺旋、β折叠和无规则卷曲蛋白构型的含量分别为2611 %、5318 %和2210 %。等电聚焦电泳测得酶的等电点为4169、4185 和5101。NRPR 单向和双向SDS2PAGE表明该酶含有链内二硫键。氨基酸组成分析发现该酶由约402 个氨基酸残基组成,其中Asp 、Gly、Leu、Ala、Glu 和Val 的含量较高。脲可抑制SOD 活性,并使其紫外光谱发生变化,荧光发射峰强度变小。溴乙酸(BrAc) 抑制酶的活力,使其紫外光谱发生变化,荧光发射峰强度变小。二巯基苏糖醇(DTT) 使酶的活力发生变化,紫外吸收峰增大,荧光发射峰变小。