诱导多能干细胞iPSC培养基质如何转换注意事项

摘要 : 滋养层细胞在胚胎干细胞的培养中扮演了双重角色，同时提供了生长底物和生长因子。后者我们能用外源的生长因子来替代。至于前者，一些研究人员也开始用基底膜基质来替代，如BD的Matrigel。当然，人类胚胎干细胞及诱导多能干细胞（iPSC）的最佳培养条件是成分完全明确，并且完全人源性的。 为此，StemCell Technologies公司就推出了StemAdhere Defined Matrix，该产品含有一种人源重组

滋养层细胞在胚胎干细胞的培养中扮演了双重角色，同时提供了生长底物和生长因子。后者我们能用外源的生长因子来替代。至于前者，一些研究人员也开始用基底膜基质来替代，如BD的Matrigel。当然，人类胚胎干细胞及诱导多能干细胞(iPSC)的最佳培养条件是成分完全明确，并且完全人源性的。

为此，StemCell Technologies公司就推出了StemAdhere™ Defined Matrix，该产品含有一种人源重组蛋白，可用于人类多能干细胞的长期培养。StemCell 公司推荐使用该基质胶作为Matrigel的替代品，虽然其价格会比Matrigel贵30%-40%，但它成分明确，并且可与TeSR™2培养基共同使用，带来一个完全确定、无动物蛋白、不依赖滋养层的培养系统。

当然，从Matrigel转换到StemAdhere，iPSC需要一个适应过程，StemCell公司也开发出一个优化步骤，便于培养的转换。据专家介绍，iPSC最初会经历一个“适应期”，正如之前从滋养层细胞到无滋养层条件的转换。在刚刚转换到StemAdhere 时，iPSC培养物的粘附和扩增速率都低于预期。在2-4代后，生长和铺板效率通常会改善，并达到之前的水平。详细步骤请点击此处查看。

Stemcell的专家还给出了5条建议，让您优化从Matrigel到StemAdhere的培养转换。

1.在传代StemAdhere上培养的iPSC细胞时，使用Gentle Cell Dissociation Buffer，而不是dispase解离酶。

2.使用非组织培养处理的培养板，因为StemAdhere蛋白不能很好地粘附在组织培养处理的塑料制品上。

3.在传代前仔细检查您的培养物，排除分化区域。

4.在最初的转换步骤中，以1:1的比例分割细胞，以确保高水平的粘附。

5.在后续传代时，分割比例可更高一些，以维持最佳的细胞密度。

专家还特别提醒，因基质组分的差异，iPSC在适应StemAdhere时，形态上会有轻微的改变。这是很正常的，StemAdhere上的克隆将继续表达高水平的多能性标志物，维持正常的核型，并保留了在畸胎瘤实验中产生三个胚层的能力。

Stemcell公司的产品包括：检测造血干细胞功能的半固体培养基MethoCult®和MyeloCult®系列，培养和鉴定间充质干细胞的MesenCult®系列，培养和分析神经干细胞的NeuroCult®系列，培养胚胎干细胞和多能干细胞的Es-Cult®系列产品，可以分选各种细胞的免疫磁性分选系统EasySep®，全自动细胞分选仪RoboSep®，全自动克隆挑选系统EasyPick®，及与其配套使用的ClonaCell®-HY试剂等等。