柱层析紫外分光光度法测定射干、川射干、白射干中总黄酮的含量

作者:陈芳群

射干Belamcanda chinensis(L.)DC，川射干(莺尾)Iris tectorium Maxim、白射干Iris dichotoma Pal1.的干燥根茎，均为鸢尾科植物，前者苟中国药典1985年版收载品种， 后两者依次为四川，陕西地方习用主流品种，在药用上有相似的作用，均含有多种异黄酮成份，主要化台物基本相同， 以射干甙(tectoridin)， 射干甙元(tectorlgenin).鸢尾甙元(irigeni)为主，这些成份具有消炎抗流感等活性，是射干的有效成份之一。

本文采用将样品提取液经聚酰胺柱层析届，用紫外分光光度法，于2B6±2rim波长外测定吸收度，以射干甙计算总黄酮含量，方法简单，较准确，易于推广使用，为考查药材内在质量，提供了一种可靠易行方法。

一.仪器及药品

射干甙对照品(自提)熔点257～258℃，并经元素分析，紫外， 红外，质谱等进行鉴定聚酰胺(83305部队101厂产10～30目)，使用前用70%乙醇预处理。

层析柱：内径2.7cm，长24cm。

超声振荡器：无锡超声电子厂产品。

紫外舟光光度计SP 7-500 型或日本岛津-260。

二 实验方法

1.总黄酮的紫外吸收曲线精密称取射干、川射干、白射干粉末各1g(3号筛)，分别置50ml容量瓶中，加入甲醇45ml，放入超声振荡器中，摄荡提取1小时、取出，放冷，加甲醇至劐度.摇匀，静置，精密量取各澄清液适量，分别置50ml容量瓶中，加70%乙醇至刻度.摇匀.并用射干甙对照品的70%乙醇液(适当浓度)作对照，于紫外分光光度计上.在200～400nm波长范围内测定其吸收曲线，随行试剂作空白。

2.提取时间的确定

精密称取射干(或川射干)粉末lg，分别置50m1容量瓶中，加甲醇45m1，放入超声振荡器中，分别振荡提取15，30，60，9O，120分钟，取出，放冷， 加甲醇至刹度， 摇匀， 静置，分别精密吸取等量澄清液适量，置5Oml容量瓶中，用70%己醇稀释至刘度，在266±2nm波长处测定吸收度，实验结果表明，提取30分钟已接近提取完全， 为了充分提尽，故采用l小时。

3.标准曲线绘制

精密称取射干甙对照品lOmg(105℃乾燥至恒重)，置10ml容量瓶中，加70%乙醇适量溶解，并稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml置l0ml窖量瓶中，加70%乙醇稀释至刻度，摇匀。精密量取0.1，0.3，0.5，0.7，0.9ml，分别置lOml容量瓶中，各加70%乙醇稀释至刻度，摇匀，于266nm波长处，测定吸收度，随行试剂作空白，绘制标准曲线，表明射干甙浓度在0.001～0.009mg/ml范国内符台比耳定律， 回归方程为x=0.4683y-0.2048，r=0.9998。

4.回收率试验：精密称职射干粉末1g，加入精密称定的2Omg射干甙对照品，按样品测定法项下进行提取，层析、测定，得回收率平均值(n=5)。未经层析1.45%，层析后2.09%。

5，样品的涮窟及结果精密称取样品粉末(3号筛)lg，置50ml容量瓶中，加甲醇45ml，放入超声振荡器中振荡提取1小时， 取出，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，静置，精密量取上清液0.10～0.2ml(射干，白射干0.2ml，川射干0.1m1).于装有0.3g聚酰胺的层析柱上，用70%乙醇进行洗脱， 流速每分钟约20滴，收集洗脱液，定容成50m1，摇匀，在波长266±2nm处测定吸收度， 随行聚酰胺70%乙醇洗脱液作空白对照， 由于标准曲线通过原点，采用外标一点比较法(即随行与样品提取液相近浓度的射干甙70%乙醇液，测定其吸收度)计算其含量(或用射干甙标准曲线或用回归方程计算)，此即层析后样品总黄酮含量。同时男取相同量的上述样品提取液，分别置50ml容量瓶中，用70%乙醇稀释至刻度，随行空白试剂作对照，于上述波长处，测定嗳收度， 按上述方法计算其含量.此即未经层析样品提取液总黄醑含量。

三.小结

本文介绍三种射干中，含总黄酮以川射干最高，正品射干与白射干相近，这和文献记载川射干有小毒，泻下是否有关，值得进一步探讨。本品简便易行，含量测定数据较准确可靠，易于推广使用。

参考文献

[1] 中国药典，252页1985

[2] 四川省中药材标准，l3页，198

[3] 江苏医学院编·中药大辞典，上册，746页，1975