一种快速简便的进行线粒体膜电位检测的方法

　　背景简介：

　　线粒体是细胞新陈代谢的主要细胞器，起着“能量工厂”的作用。线粒体内部通过一系列的氧化反应去氧化丙酮酸和NADH，以产生储存能量的ATP分子。而这一系列反应的驱动力是线粒体膜上电化学质子的梯度差，也叫做膜电位。由于这种质子的梯度差为磷酸化和氧化反应提供了“驱动力”，因此它也被当作一个衡量细胞的整体健康状态的指标，同时也可作为研究环境毒性对细胞新陈代谢影响的一个定量监测的指标。

　　那么该如何来监测线粒体的膜电位呢？

　　今天介绍一个简单的方法，即Moxi GO II新一代流式细胞分析仪结合TMRE染料法。

　　TMRE（四甲基罗丹明高氯酸乙酯）是一种线粒体特异的具有红橙色荧光(540/595nm Ex/Em)的阳离子染料，具有膜通透性，会在带负电荷的线粒体膜中迅速积累。线粒体的膜电位越高，TMRE的积累量越多，荧光值越高，因此可以通过检测TMRE荧光值的强度来定量地评估线粒体膜电位，从而评估细胞的健康状态。

　　在该应用中，使用 Moxi GO II和TMRE染料可以便捷的进行不同药物处理后线粒体膜电位的检测，ORFLO Moxi GO II系统是简单、快速、有效的流式细胞术平台，可广泛的应用于细胞分析。该系统通过公认的金标准库尔特原理进行细胞计数和尺寸检测，同时使用532nm激光器、561nm/ LP滤光片和525/45nm滤光片、双PMT进行荧光检测。该荧光通道可用于许多常见的荧光基团，包括藻红蛋白(PE,用于免疫标记)，碘化丙啶(PI,用于细胞活性)，GFP/RFP (用于转染效率评估)等。Moxi GO II利用一次性检测芯片，无需提前准备机器、无需清洁、无需维护，仪器即开即用，无需关机，10秒内即可运行完一个测试。这些特点使得Moxi GO II适合于快速测试和分析的实验，如该文所示的线粒体膜电位的动力学检测。