乳房缩小整形术组织标本中上皮细胞的制备
IrECM三维培养乳腺干细胞
实验方法原理 | |
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实验材料 | 组织标本 |
试剂、试剂盒 | 无菌DMEM F12 50:50 加人1.2 mg ml重碳酸盐 CMD3培养基 胶原酶 900 IU ml Vitrogen 解剖刀 培养瓶 625px2 Vitrogen包被 8μg cm2 |
仪器、耗材 | 摇床 离心管 |
实验步骤 | (a)手术后,立即将组织标本转移至DMEM/F12(1:1)。 (b)用两把解剖刀(每只手一把)将组织剪成约2 mm的小块。 (c)置摇床上(60 r/min),37℃,胶原酶消化24〜48h。 (d)离心消化物数秒钟,175g,脂肪和富含脂质的细胞漂浮于上清液的上方,将其弃去;上清液中主要含有血管来源的小粒和单个细胞;沉淀中含有血管和上皮来源的较大组织样颗粒。 (e)用10ml DMEM/F12重悬沉淀。在30s内,上皮来源的组织样大颗粒会沉淀,血管来源部分则悬浮于培养基中。因为它们最终也会沉淀下来,所以应该同上皮来源的组织样大颗粒分离。通常,再经过两轮重悬沉淀,就可以将上皮来源的组织样大颗粒与血管分离。 (f)离心d步骤中的上清液,125g,5 min。沉淀中含有小血管。弃去上清,离心,500g,10 min,则沉淀中含有成纤维细胞。 (g)将上皮来源的小粒,种植到Vitrogen包被的625px2培养瓶中。必要时,其他部分也可种植。 (h)加人CDM3培养基,培养瓶置于37℃,5% CO2温箱中 展开 |
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