快速了解霉菌形态观察中一般观察法的步骤

　　（一）一般观察法：

　　1.

　　点种培养：

　　用接种针沾取斜面少许孢子在无菌的察氏培养基中央穿刺接种（倒置培养皿穿刺接种），30℃下培养7-10天，形成巨大菌落培养物。

　　2.

　　直接制片：在载玻片中央加一滴乳酸石炭酸棉蓝染色液于洁净，打开霉菌平板培养物，用解剖针从菌落的边缘挑取少量带有孢子的菌丝，放入载玻片的染液中，细心地把菌丝挑散开，加盖玻片，注意不要产生气泡，置于显微镜下观察，菌丝呈兰色，颜色的深度随菌龄的增加而减弱。观察根霉时，注意观察其菌丝有无横隔、假根、孢子囊柄、孢子囊、囊轴、囊托、孢子囊孢子及厚垣孢子。

　　观察毛霉时，注意观察其菌丝无横隔、孢子囊柄、囊轴、孢子囊孢子及后垣孢子。观察曲霉时，注意观察其菌丝有横隔、足细胞、分生孢子梗、顶囊、小梗（形状、层数及着生情况）、分生孢子。观察　青霉时，注意观察其菌丝有横隔、分生孢子梗、帚状枝（小梗的轮数及对称性）、分生孢子。观察红曲霉时，注意观察其菌丝有横隔、分生孢子着生情况、闭囊壳、子囊孢子。

　　（二）载玻片湿室培养观察法

　　也称载片培养法，用无菌操作将培养基琼脂薄层置于载玻片上，接种后盖上盖玻片培养，霉菌即在载玻片和盖玻片之间的有限空间内沿盖玻片横向生长。培养一定时间后，将载玻片上的培养物置于显微镜下观察。载片培养法制备的标本片可直接在显微镜下观察，这种培养观察方法保持了霉菌的自然生长状态，尤其适用于根霉的假根、匍匐菌丝，曲霉的足细胞的观察，并且还可在同一标本片上观察霉菌的不同生长阶段的形态。

　　载玻片湿室培养观察法具体操作：

　　1.

　　准备湿室：在培养皿底部铺一张圆形滤纸片，滤纸片上依次放上“U”形载玻片搁架、载玻片、盖玻片（两片），盖上皿盖，外用纸包扎，高压灭菌（9.8×104Pa）20分钟后，60℃烘箱干燥，备用。

　　2.

　　取菌接种：用接种环挑取少量待观察的霉菌孢子，置于湿室的载玻片上，每张载玻片可接同一菌种的孢子两处。接种时只要将带菌的接种环在载玻片上轻轻碰几下即可。（接种量要少，以免培养后菌丝过于稠密而影响观察）

　　3.

　　加培养基：用无菌细口滴管吸取少许融化并冷却至45℃的培养基，滴加到载玻片的接种处，培养基应滴得圆而薄，直径约为0.5cm（滴加量一般以1/2小滴为宜），注意无菌操作。

　　4.

　　加盖玻片：在培养基未彻底凝固前，用无菌镊子将皿内的盖玻片盖在琼脂薄层上，用镊子轻压盖玻片，使盖玻片和载玻片之间的距离相当接近，但不能压扁。（盖玻片不能紧贴载玻片，要彼此留有小缝隙，一是为了通气，二是使各部分结构平行排列，易于观察。）

　　5.

　　倒保湿剂：每皿倒入约3mL 20%的无菌甘油，使皿内滤纸完全湿润，以保持皿内湿度，盖上皿盖。制成载玻片湿室，28℃培养。观察：将培养好的载玻片取出，置于显微镜下直接观察。