生物素酰化探针的检测实验——化学发光法

DNA

生物素磷酸酶

紫外灯离心机

1.  用夹子固定已转印的尼龙膜的边角于一小片干的吸水纸上，样品面朝上，放进温箱内12~80℃放15~30 min 或温室晾干过夜。
 

2.  将带核酸的面朝上暴露于紫外灯下，用最适的时间交联。

3.  用生物素探针与膜杂交，用适当强度的洗液洗涤。

4.  杂交后、将膜置于杂交袋中。

5.  封口，在一个角留有一小孔便于加入和排出液体。

6.  加入1体积的封阻液、室温作1 min 轻微摇动、倒干溶液。

7.  加入1 mg/ml 链亲和素至1体积的封阻液至终浓度为1 μg/ml，在杂交袋中室温温育4 min，轻微摇动，倒干溶液。

8.  加入10体积诜液 I，室温洗膜4 min 轻微摇动，倒干溶液，重复1次。

9.  加入生物素酰化碱性磷酸酶至1体积的封阻液，室温作用4 min 轻微摇动、倒干溶液。

10.  用10体积洗液 I 洗膜2次，同步骤8。

11.  用0.5体积底物稀释液稀释化学发光底物，在杂交袋中室温作用4 min 轻微摇动，打开杂交袋，尽可能倒干溶液。

12.  压平杂交袋上的折皱，重新封口，结合核酸的一面向上，用一张X光片压好，在暗盒内曝光10~20 min。