胶体金免疫层析试纸条技术及缺点

　　将特异性的抗原或抗体以条带状固定在膜上，胶体金标记试剂（抗体或单克隆抗体）吸附在结合垫上，当待检样本加到试纸条一端的样本垫上后，通过毛细作用向前移动，溶解结合垫上的胶体金标记试剂后相互反应，再移动至固定的抗原或抗体的区域时，待检物与金标试剂的结合物又与之发生特异性结合而被截留，聚集在检测带上，可通过肉眼观察到显色结果（胶体金红色）。有三种反应模式：夹心法，间接法，竞争抑制法。

　　1、双抗体夹心法（测抗原）胶体金试纸原理

　　以新型冠状病毒为抗原，试纸上有两种针对新型冠状病毒的抗体存在，在试纸不同的位置上。而胶体金标记的抗体是其中一种针对抗原的抗体，在试纸的结合垫上。

　　（1）当咽拭子、鼻拭子、肺泡灌洗液的样本滴上加样孔之后，再滴加几滴流动介质，当临床样本里面有特异性病毒抗原（Antigen）时，在结合垫处的金标抗体（比如识别冠状病毒单抗和胶体金偶联）会识别并结合病毒抗原，形成“新型冠状病毒-金标抗体”复合物；

　　（2）样品在层析作用下往前移动，当到达T线时（检测线），T线处具有T线抗体（另一种针对新型冠状病毒的抗体，比如多抗，和金标单抗识别的抗原表位不同，可以识别同一抗原），则会形成“T线抗体—待测抗原—胶体金偶联抗体”复合物，所以T线处胶体金大量聚集从而显现红色（阳性）

　　（3）过量的金标抗体会继续从T线处流向C线处（质控线），C线处具有专门针对金标抗体的抗体（抗-抗体），当过量的胶体金颗粒到达C线后，C线抗体就会与金标抗体结合形成“C线抗体-金标抗体”复合物，大量积聚后显红色。C线抗体识别金标抗体的能力极强，所以质控线一定会显红色，如果这条线没有显色，那么这次检测结果是无效的。

　　2、间接法（测抗体）胶体金试纸原理

　　还是以新型冠状病毒为例，不过相较前面咽拭子、肺泡灌洗液的样本，此处需要的是血液（血清）样本。划重点当病原侵入机体最早产生的抗体是IgM（IgM大约一周后产生，知识点随便翻一本免疫学的书）。所以机体会产生针对新型冠状病毒的IgM（就叫IgM*）。

　　（1）血液（血清）样本滴加后，结合垫处的金标抗原（比对金标新型冠状病毒某体外重组蛋白），形成“IgM*-金标抗原”复合物；

　　（2）在T线处具有抗IgM抗体，当“IgM*-金标抗原”到达后，形成“抗IgM抗体-IgM*-金标抗原”复合物，大量聚集显红色；

　　（3）在C线处具有针对金标抗原的抗体（抗金标抗原抗体），不管样本里面有没有IgM*，过量的金标抗原会到达C线处，与抗金标抗原抗体结合，形成“抗金标抗原抗体-金标抗原”复合物显红色。

　　3、竞争法（小分子物质检测）胶体金试纸原理

　　小分子抗原或半抗原（比如小分子激素或药物）缺乏可作夹心法的两个以上位点，因此不能采用双抗体夹心法，可以采用竞争法模式。样本中的一定量的小分子抗原和固相抗原竞争结合金标抗体，样本中抗原量越多，结合在固相上的标记抗体就会越少，最后显色的也会越浅。为方便大家理解，我们以脂多糖(（LPS）)为例。

　　（1）若样品中有LPS，则LPS和金标抗体结合，形成“LPS-金标抗体”复合物。T线处为LPS-BSA偶联物（LPS通过与BSA等大分子物质偶联从而能够固定于NC膜），金标抗体由于被样品中的LPS优先结合，从而在T线处与不能与BSA偶联并固定的LPS结合，故T线处结合反应被抑制，无显色反应；而“LPS-金标抗体”复合物继续向后泳动，在C线处（含抗金标抗体）结合形成“LPS-金标抗体-抗金标抗体”复合物显红色（T线无色，C线红色）。

　　（2）若样品中没有LPS，则金标抗体随无LPS样品液体流动至T线处时，与通过BSA固定在NC膜上的LPS结合，形成“金标抗体-LPS-BSA”，从而出现红色显色反应；而过剩的“金标抗体”继续向后泳动，在C线处（含抗金标抗体）结合形成“金标抗体-抗金标抗体”复合物显红色（T线红色，C线红色）。

　　4、胶体金法优缺点

　　胶体金的最大优点就是快速，方便。但是缺点也很明显—通量不高而且试纸的准确性高度依赖于抗体的特异性（抗体特异性不好容易有交叉反应）。