融合蛋白的酶解实验

融合蛋白

SDS

水浴锅 培养箱 离心机

1.  准备两个小量预试验反应以确定最佳温育时间：

（1）反应1：20 μl 含有1 μl 200 μg/ml Xa因子的1 mg/ml 融合蛋白，室温下反应

（2）反应2：5 μl 不含因子Xa的1 mg/ml 融合蛋白（模拟消化），室温下反应。

2.  分别在2、4、8和24 h取出5 μl 反应液，加2×SDS样品缓冲液5 μl，-20℃下冻存。

3.  在24 h 时，将5 μl 反应2（模拟消化）液与5 μl 2×SDS样品缓冲液混合。

4.  将5 μl 原始融合蛋白溶液与5 μl 2×SDS样品缓冲液混合。

5.  将所有样品于沸水浴中加热10 min，加样到SDS-聚丙烯酰胺凝胶上电泳，根据裂解程度确定适当的温育时间。

6.  确定了适当的裂解条件后，将余下的融合蛋白样本按比例扩大反应，仅留小量的未裂解融合蛋白作对照用。以SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳监测裂解程度。