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融合蛋白的酶解实验

基本方案 辅助方案 备选方案1 辅助方案 备选方案2 备选方案3 实验材料 融合蛋白 试剂、试剂盒 SDS 仪器、耗材 水浴锅 培养箱 离心机 实验步骤 1. 准备两个小量预试验反应以确定最佳温育时间: (1)反......阅读全文

新颖的融合蛋白表达系统

 研究者们在分离到某一基因后,要对其编码蛋白质进行研究最理所当然的工作就是表达——即:有目的性地合成外源基因产物。在重组DNA技术的发展早期,人们认为在基因的前面有一个强启动子和一个起始密码子就足以在大肠杆菌中获得很好的表达。随后,认识到获得有效的翻译所需的条件要复杂得多,除了要有强启动子

谷胱甘肽琼脂糖亲和层析纯化融合蛋白实验

pGEX 载体表达的外源蛋白与谷胱甘肽 S 转移酶融合,因此可以通过谷胱甘肽-琼脂糖亲和层析进行纯化。本实验来源于分子克隆实验指南(第三版)下册,作者:〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞尔。实验材料表达 GST 融合蛋白的大肠杆菌细胞试剂、试剂盒二硫苏糖醇谷胱甘肽洗脱缓冲液磷酸缓冲钠盐溶液Tri

谷胱甘肽琼脂糖亲和层析纯化融合蛋白实验

            实验材料 表达 GST 融合蛋白的大肠杆菌细胞 试剂、试剂盒 二硫苏糖醇

谷胱甘肽琼脂糖亲和层析纯化融合蛋白实验

实验材料 表达 GST 融合蛋白的大肠杆菌细胞试剂、试剂盒 二硫苏糖醇谷胱甘肽洗脱缓冲液磷酸缓冲钠盐溶液TritonX-100DNase溶菌酶RNase凝血酶、肠激酶或 Xa 因子溶液SDS-聚丙烯酰胺凝胶仪器、耗材 SorvallSS-34 转头或相当的转头谷胱甘肽-琼脂糖树脂皮下注射针头实验步骤

选择重组蛋白表达的合适方法

重组蛋白是研究生物学过程的重要工具。需要使用表达系统来对其进行制备。合适表达系统的选择取决于重组蛋白的特性、重组蛋白的预期应用以及该系统能否生产足够量的蛋白质。作者: 伯吉斯等,主译:陈薇,本实验来自「蛋白质纯化指南」实验步骤一、引言选 择 合 适 醜 组 蛋 白 表 达 方 法 对 于 能 否 及

选择重组蛋白表达的合适方法

实验步骤 一、引言 选 择 合 适 醜 组 蛋 白 表 达 方 法 对 于 能 否 及 时 获 取 所 需 数 量 和 质 量 的 重z组蛋白非常关键。选 择 了 错 误 的表达宿主可 能 导 致 蛋 白 质错 误 折 叠 或

最新Nature子刊精选选读

  《自然·医学》   美国乔治敦大学的医学研究人员发现了一种阻断尤文氏肉瘤相关融合蛋白活性的新方法,尤文氏肉瘤是一种发生在儿童和青少年期的罕见癌症。该项科研成果为研发治癌药物开发了新思路。   研究人员报告说,他们发现了一个小分子,并成功对其进行了测试。该小分子可阻止融合蛋白与形成肿瘤的另一个

DNA重组(DNA recombination)技术:外源基因的蛋白表达-4

(3)CHO细胞稳定表达系统:动物细胞瞬时表达系统中外源基因没有稳定地整合到宿主细胞染色体中,一染色体外DNA的形式存在。因而只能瞬时表达。要使外源基因在宿主细胞中高效、稳定地表达,必须建立一个稳定表达系统,包括适宜的表达载体、有效的基因转染、标记基因和目标基因的选择与共扩增、受体适当的受体细胞和培

研究揭示黄病毒科NS3蛋白酶-解旋酶协同作用新机制

  目前已知的RNA病毒的基因组长度均不超过35kb,编码容量非常有限。因此包含一个以上功能域的蛋白在这类病毒中较为常见,黄病毒科NS3蛋白即为丝氨酸蛋白酶和超家族二解旋酶的天然融合体,在病毒多聚蛋白酶解和基因组复制这两个重要过程中发挥关键作用,其两个功能域之间的协同作用机制尚不清晰。  中国科学院

谷胱甘肽琼脂糖凝胶的使用方法

实验概要本实验介绍了谷胱甘肽琼脂糖凝胶的使用方法。Pgex载体表达的外源蛋白与谷胱甘肽S-转移酶溶合,因此可以通过谷胱甘肽-琼脂糖亲和层析进行纯化。Pgex是一类以谷胱甘肽(γ-谷胱甘肽半胱胺酰甘氨酸)作为底物,通过形成硫醇尿酸失活毒性小分子的酶。由于GST对底物的亲和力是亚豪摩尔级的,因此谷胱甘肽

在免疫沉淀IP&免疫荧光IF如何正确的选择Flag标签抗体?

在免疫沉淀IP&免疫荧光IF如何正确的选择Flag标签抗体?Flag标签系统是已被公认的用于表达、纯化以及检测融合蛋白的表达系统,广泛应用于Western blotting、免疫细胞组化、免疫共沉淀、流式细胞术、蛋白纯化以及蛋白相互作用、蛋白分离等多个研究领域。Flag标签是一个与重组蛋白相

蛋白质糖基化修饰在生命体中的作用

  治疗性重组蛋白或单克隆抗体是影响细胞、组织、器官乃至生命的外源性重组蛋白,在细胞内成熟过程中几乎均会发生蛋白质糖基化修饰,而糖基化修饰的质和量的差异,可能会影响相关重组蛋白表达水平、结构及功能。重组蛋白表达服务可以帮助研发人员研发高效、高质量的蛋白质。在生物体中50%以上的蛋白质存在糖基化现象,

杨芃原:微流控技术有望十年内得到普遍应用

【导语】微全分析系统自90年代提出以来,目前已发展成为当今世界上最前沿的科技领域之一。凭借其高通量、低消耗的技术优势,将为生物医药、新药合成筛选、临床诊断等领域的研究和产业化打开一扇通往美好明天的大门。在第六届微全分析学术会议期间

冠状病毒17问:2019-ncov疫苗有多重要?

什么是冠状病毒?  冠状病毒(Coronavirus)是一种有包膜(或囊膜)的正链线性RNA病毒,也是一种最大的RNA病毒。冠状病毒属于网巢病毒目。我们通常说的冠状病毒是冠状病毒科的两个亚科之一。该亚科包括甲、乙、丙、丁(α,β,γ和δ )四个属。  冠状病毒的包膜是由双层脂质和跨膜蛋白组成。病毒的

Nat Rev Genetics | 环状RNA的合成与功能

  环状RNA(circular RNA,circRNA)是一种新兴的内源性非编码RNA(noncoding RNA,ncRNA),是继microRNA (miRNA)以及long noncoding RNA (IncRNA)后非编码RNA家族中极具研究潜力的新成员。越来越多的研究表明,环状RNA具

双杂交和其他双成分系统实验

            实验材料 载体和酵母菌 试剂、试剂盒 缓冲液和溶液 SD

Flag标签抗体在免疫沉淀IP&免疫荧光IF中的应用

Flag标签系统是已被公认的用于表达、纯化以及检测融合蛋白的表达系统,广泛应用于Western blotting、免疫细胞组化、免疫共沉淀、流式细胞术、蛋白纯化以及蛋白相互作用、蛋白分离等多个研究领域。Flag标签是一个与重组蛋白相融合的由 8个亲水氨基酸(DYKDDDDK)组成的多

多肽抗生素研究进展(三)

3.2 基因工程合成法 利用基因工程的方法生产多肽抗生素是降低生产成本的一条有效途径。但是多肽抗生素对原核细胞的毒性在一定程度上限制了其在原核表达系统中的应用。而真核表达系统的较低表达效率也是其工业化生产的一个障碍。为了克服多肽抗生素对细菌细胞的毒性,人们采用融合表达或选择对多肽抗生素具有抗性的株系

细胞自噬的研究方法:我是为了保护自己

自噬是近年来很热门的领域,很多人傻傻分不清自噬和死亡。今天就带大家一起来复习一下。自噬的过程——从一张图开始步骤 1:细胞接受自噬诱导信号后,在胞浆的某处形成一个小的类似「脂质体」样的膜结构,然后不断扩张,但它并不呈球形,而是扁平的,就像一个由 2 层脂双层组成的碗,可在电镜下观察到,被称为 Pha

植物原生质体制备及转化试剂盒使用说明

植物原生质体是指脱去全部细胞壁由质膜包被的具有生命活力的裸露细胞。它具有细胞生命特征和全能型,是细胞无性系变异和突变体筛选的重要来源,同时也是植物遗传工程的理想受体和遗传改良的理想材料。酶解法分离原生质体是一个常用的技术,其原理是植物细胞壁主要由纤维素、半纤维素和果胶质组成,因而使用纤维素酶、半纤维

BCEIA2015:仪器分析在生物医药中的应用

  分析测试百科网讯 2015年10月29日,BCEIA2015期间,召开了仪器分析在生物医药中的应用的会议,会议主要讨论了分析仪器在生物医药中的应用,整个会议由汪正范老师主持,分析测试百科网跟踪报道了整个会议的进程。汪正范老师  北京利德曼生化股份有限公司陈立杰作报告

细胞自噬的研究方法

正常培养的细胞自噬活性很低,不适于观察,因此,必须对自噬进行人工干预和调节,经报道的工具药有:一、自噬诱导剂(1) Bredeldin A / Thapsigargin / Tunicamycin :模拟内质网应激(2) Carbamazepine/ L-690,330/ Lithium Chlor

细胞自噬的研究方法

正常培养的细胞自噬活性很低,不适于观察,因此,必须对自噬进行人工干预和调节,经报道的工具药有: 一、自噬诱导剂  (1) Bredeldin A / Thapsigargin / Tunicamycin :模拟内质网应激(2) Carbamazepine/ L-690,330/

细胞自噬的研究方法介绍

正常培养的细胞自噬活性很低,不适于观察,因此,必须对自噬进行人工干预和调节,经报道的工具药有:一、自噬诱导剂(1) Bredeldin A / Thapsigargin / Tunicamycin :模拟内质网应激(2) Carbamazepine/ L-690,330/ Lithium Chlor

探究分泌和摄取用于细胞间通讯的外泌体和其他胞外囊泡

  尽管在20世纪60年代后期首次描述了在哺乳动物组织或液体中,有囊泡在细胞周围存在,但是直到2011年才提出通用术语“胞外囊泡(extracellular vesicle, EV)”来定义所有的由脂质双层包围的胞外结构,如图1所示。在1980年代,人们描述了EV可以通过质膜向外出芽或通过细胞内内吞

蛋白纯化经验指南-4

86) 选择sephadex G75或者superdex 75,柱子的大小一般都是按你的处理量算的,通常的柱子大多是1.6x60,2.6x60,或者有100cm的柱子,内径为1.6或者2.6的.也也有更粗的.一般都不会有问题. 1,我们实验室没有sephadex G75(3000-8000

解析SNARE解聚分子机器20S复合体的三维结构 解密解聚机制

  膜融合是生命基本和重要的过程之一,真核细胞多种形式的胞内区间具有不同的生物化学性质,细胞维持这些胞内分区之间的动态平衡主要依赖的是囊泡转运,该过程与许多重要疾病密切相关。  囊泡转运即包含转运物质的囊泡从供体出芽然后转移至目标膜,锚定之后与目标膜融合,从而使得膜蛋白、磷脂和内容物转运至另一个细胞

生物谷7月份结构生物学研究进展一览

  1. Cell:中科院生物物理所王艳丽/章新政课题组从结构上揭示Cas13a切割RNA机制  doi:10.1016/j.cell.2017.06.050  CRISPR/Cas系统是目前发现存在于大多数细菌与所有的古菌中的一种免疫系统,被用来识别和摧毁抗噬菌体和其他病原体入侵的防御系统。在CR

RNAi治疗新进展: 有望治愈致命遗传病

一种siRNA分子(紫色和绿色部分)可能治疗遗传性肝脏疾病   RNA干扰(RNAi),基因沉默技术的一种,显示了疾病治疗的巨大潜力,但从来没有人能确切证实它对疾病治疗所能发挥的作用。但是现在RNAi已经逐渐获得了研究人员的一致好评。一项新的研究表明,该方法能够显著并安全地削弱导致一种罕见的肝脏疾

了解最新进展 共享学术盛宴 看第五届全国原子光谱会议

  分析测试百科网讯 2018年9月20日,第五届全国原子光谱及相关技术学术会议在“海上丝绸之路的起点”福建泉州召开。此次会议为原子光谱和质谱、色谱及光谱检测/成像等相关研究领域的著名科学家、中青年专家和青年学子提供交流和学习机会,共同探讨原子光谱及相关技术领域的发展现状、趋势和前沿动向讨论这些相关