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一步脱蜡法在FFPE样本DNA提取中的应用

什么是FFPE福尔马林固定石蜡包埋技术(Formalin-Fixed and Parrffin-Embedded, FFPE)是一种组织保存技术。这种技术为了维持细胞核蛋白结构,先用福尔马林固定然后将组织用固体石蜡包埋,以供切片后作组织学诊断或研究使用。FFPE技术的应用福尔马林由于可以与蛋白氨基发生不可逆交联,所以对保持组织细胞结构的完整性、抗原可测定性、组织渗透性方面均优于其他固定液。因此,FFPE技术长期以来在临床检验、医学科学研究中得到广泛应用,尤其是细胞形态学研究和肿瘤病理学研究。随着这几年分子诊断领域的不断发展,FFPE技术也越来越多的被应用在对肿瘤疾病进行分子诊断。为什么要脱蜡如果要对FFPE组织进行分子生物学研究,最首先的就是要进行DNA的提取。 但是固定剂的交联作用对核酸是有害的,福尔马林石蜡和交联作用会妨碍核酸的提取,抑制DNA聚合酶的活性从而影响PCR扩增。除此之外,石蜡阻碍消化液对组织的渗透,从而抑制......阅读全文

一步脱蜡法在FFPE样本DNA提取中的应用

什么是FFPE福尔马林固定石蜡包埋技术(Formalin-Fixed and Parrffin-Embedded, FFPE)是一种组织保存技术。这种技术为了维持细胞核蛋白结构,先用福尔马林固定然后将组织用固体石蜡包埋,以供切片后作组织学诊断或研究使用。FFPE技术的应用福尔马林由于可以与蛋白氨基发

如何充分脱蜡?

(1)蜡不溶于水,如果脱蜡不干净,少许蜡存留于切片上,将会引起染色不均匀、阳性物时隐时现、真假难辨、背景染色增加等。为了解决上述的问题,切片在染色前必须彻底脱蜡,目前用于脱蜡的试剂主要是二甲苯,因它脱蜡力强,脱蜡时间较短;(2)脱蜡的时间要根据季节,室温和试剂的新鲜谋面是在不同。如果在夏天,室温较高

一步法提取质粒DNA

一步法提取质粒DNA主要用于鉴定阳性克隆。主要步骤如下:收集1.5mL菌体,彻底除去培养基;加入50ulSTE缓冲液重悬菌体;加入50ul酚:氯仿;异戊醇(25:24:1),混匀;12000rpm离心5分钟,取上清到另一离心管中;加入NH4Ac至终浓度2M,并加入2倍体积的乙醇,混匀,室温或冰上放置

美借助“脱蜡铸造工艺”打印出三维脉管系统

  组织工程和再生医学领域不断取得新进展,人们希望有一天能用病人自己的细胞,培养出各种人造器官,把病坏器官替换下来;或者培养出动物肌肉来做牛排,而不再杀牛取排。生物工程师们已经能在二维层面培养出任何一种组织类型,但要跨越到三维,还面临着不小的障碍。如果让大量细胞简单地堆在一起,没有合理的内部结构,

总RNA提取实验——一步法

实验材料RNA试剂、试剂盒乙酸钠氯仿异戊醇异丙醇乙醇SDS酚仪器、耗材离心机分光光度计摇床实验步骤1.  组织来源材料:100 ng 组织加1 ul 变性液,在玻璃Teflon匀浆器中将其匀浆。2.  培养细胞:离心弃悬浮细胞培养液或倒去单层培养细胞培养液(不需用生理盐水洗涤),每107细胞加入1

一步法检测肝素的相关介绍

  一步法测量肝素使得检测更加简单,并缩短了时间。这种方法不添加外源性AT。  检测是基于竞争抑制原理。加入Xa到血浆中与底物混合,立即同时有2个反应:底物被Xa水解和Xa被肝素-AT复合物抑制。一旦反应达到平衡,底物中释放出的pNA与待测血浆中肝素浓度成反比。在这个检测中,没有添加外源性的AT,完

大肠杆菌转化实验——一步法

实验材料    大肠杆菌试剂、试剂盒    TSS葡萄糖LB仪器、耗材    离心机分光光度计摇床实验步骤 1.  按1:100的比例将过夜培养的菌液如人到新鲜的LB培养液中,于37℃培养至为OD600为0.3~0.4。  2.  加入等体积的2x SS于菌液中,在冰上温和地混匀。  3.  将10

一步法RT_PCR详细步骤

1.材料和方法Access RT-PCR System 试剂盒 (A1250):Promega 公司产品。500u AMV Rev 目的基因 se Transcriptase, 5u/ul500u Tfl DNA Polym 目的基因 ase, 5u/ul1 ml AMV/Tfl 5×Reactio

双位点一步法的操作步骤

在双抗体夹心法测定抗原时,如应用针对抗原分子上两个不同抗原决定簇的单克隆抗体分别作为固相抗体和酶标抗体,则在测定时可使标本的加入和酶标抗体的加入两步并作一步。这种双位点一步不但简化了操作,缩短了反应时间,如应用高亲和力的单克隆抗体,测定的敏感性和特异性也显著提高。单克隆抗体的应用使测定抗原的ELIS

双位点一步法和间接法区别

间接法是利用酶标记的抗体以检测已与固相结合的受检抗体,故称为间接法。双位点一步法是在双抗体夹心法测定抗原时,如应用针对抗原分子上两个不同抗原决定簇的单克隆抗体分别作为固相抗体和酶标抗体,在测定时可使标本的加入和酶标抗体的加入两步并作一步。在一步法测定中,应注意钩状效应,类同于沉淀反应中抗原过剩的后带