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抗体药物是目前生物技术药物研究中最为活跃的领域，特别是在肿瘤和自身免疫性疾病等方面的临床应用，更是大放异彩。随着临床需求的增加，单克隆抗体药物发展迅速，FDA已批准的抗体药物多达70多个，抗体药物销售量年增长率基本在10%以上，大大高于制药行业平均水平，其市场规模已经达到千亿美元。 我国针对单克隆抗体药物的研究与开发也是如火如荼，行业内竞争异常激烈。据统计我国生物类似药研发占全球在研类似药总数的36%。目前，我国约有600家企业在抗体药物领域布局，约有200家企业已提交抗体药物临床试验申请，且靶点比较集中，以TNF-α、EGFR、VEGF、HER2为主。其中，研发和申报比较靠前的企业有齐鲁制药、信达生物、复宏汉霖以及嘉和生物等。 高速增长的抗体药物正在改变包括癌症在内的多种疑难疾病的治疗观念，因此如何提高哺乳动物细胞生产治疗性抗体的产量和质量便越来越受到重视。 细胞培养是单克隆抗体药物生产的关键环节，直接影响到单抗的产......阅读全文
3.2 免 疫 B 细胞的制备血清效价有意义(>1 : 1000)的免疫后动物可以提供抗原反应性B 细胞用于融合。这些细胞可以从脾脏或淋巴结中获得。动物用吸人CO2 处死，在无菌操作下取组织，放 在 4°C无血清培养基中，最多可放lh 。用慑子或针头轻轻打开组织脾脏或淋巴结的外包膜获得
微生物细胞培养，简称微生物培养，包括原核细胞培养（细菌培养）和真核细胞培养（霉菌培养和酵母培养）。这些细胞小、且具有细胞壁，细胞周期非常短，如细菌每20-30min增殖1次。植物细胞培养指原生质体培养。未考虑分离出原生质体的植物细胞培养，无论是游离的单细胞或组织块，都称作植物组织培养。动物组织细胞培
（二）细胞融合 1．细胞融合前准备 （1）骨髓瘤细胞系的选择：骨髓瘤细胞应和免疫动物属于同一品系，这样杂交融合率高，也便于接种杂交瘤在同一品系小鼠腹腔内产生大量McAb。常用的骨髓瘤细胞系见表2-4。表2-4用于融合试验的主要骨髓瘤细胞系名 称来 源耐 受 药 物Ig链H LP3/X63-Ag
实验方法原理1975年，Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合，形成的杂交细胞既可产生抗体，又可无限增殖，从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破不仅为医学与生物学基础研究开创了新纪元，也为临床疾病的诊、防、治提供了新的工具。 制备单
1975年，Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合，形成的杂交细胞既可产生抗体，又可无限增殖，从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破不仅为医学与生物学基础研究开创了新纪元，也为临床疾病的诊、防、治提供了新的工具。 制备单克隆抗体包括动物免疫
实验方法原理 1975年，Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合，形成的杂交细胞既可产生抗体，又可无限增殖，从而创立了单克隆抗体杂交瘤
淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术 实验方法原理 1975年，Kohler和Milstein发现将小鼠骨
检测抗体的方法应根据抗原的性质、抗体的类型不同，选择不同的筛选方法，一般以快速、简便、特异、敏感的方法为原则。 常用的方法有: 1. ELISA用于可溶性抗原蛋白质、细胞和病毒等McAb的检测。 2. RIA用于可溶性抗原、细胞McAb的检测。 3. FACS荧光激活细胞分类仪用于检查细胞
一、前言动物细胞培养开始于本世纪初1962年，动物细胞培养规模开始扩大，发展至今已成为生物、医学研究和应用中广泛采用的技术方法，利用动物细胞培养生产具有重要医用价值的酶、生长因子、疫苗和单抗等，动物细胞培养已成为医药生物高技术产业的重要部分。利用动物细胞培养技术生产的生物制品已占世界生物高技术产品市
骨髓瘤细胞的培养可用一般的培养液，如RPMI1640，DMEM培养基。小牛血清的浓度一般在10%～20%，细胞浓度以104～5×105/ml为宜，最大浓度不得超过106/ml。当细胞处于对数生长的中期时，可按1：3～1：10的比例传代。每3～5天传代一次。细胞在传代过程中，部分细胞可能有返祖现象，
动物细胞大规模培养的生物反应器操作模式，一般分为分批式操作（batch）、流加式操作（Fed-batch）、半连续式操作（semi-continuous）、连续式操作（continuous）和灌流式操作（perfusion）五种操作模式。 1. 批式操作（batch c
细胞悬浮培养是利用生物反应器大规模培养动物细胞生产生物制品的核心技术，是当前国际上生物制品生产的主流模式，其最大优势是通过更为精确有效的工艺控制手段，在获得最大产量的同时能稳步提高产品的质量。但该技术目前在国内尚未得到广泛应用，生物制品生产仍主要采用病毒产率低、生产成本高、劳动强度大的转瓶细胞培养方
实验概要动物细胞大规模培养的生物反应器操作模式，一般分为分批式操作（batch）、流加式操作（Fed-batch）、半连续式操作（semi-continuous）、连续式操作（continuous）和灌流式操作（perfusion）五种操作模式。实验步骤1. 批式操作（batch culture）&
2、固定化方法的选择 (1) 培养规模 由于各种固定化系统可以获得相同的细胞密度，且细胞的产率主要取决于细胞的扩散，因此反应器的体积是培养规模放大的主要决定因素。虽然微载体系统可以提供最大的单元操作，但其他系统也可以通过增加单元套数而获得放大。 (2) 培养方式&nbs
现代生物技术一般认为包括基因工程技术、细胞工程技术、酶工程技术和发酵工程技术，而这些技术的发展几乎都与细胞培养有密切关系，特别是在医药领域的发展，细胞培养更具有特殊的作用和价值。比如基因工程药物或疫苗在研究生产过程中很多是通过细胞培养来实现的。基因工程乙肝疫苗很多是以CHO细胞作为载体；细胞工程中更
2. HAT选择杂交瘤 一般在融合24 小时后，加HAT选择培养液。HT和HAT均有商品化试剂50×贮存，用时1 ml加入50 ml20 ％小牛血清完全培养液中。 因为在培养板内已加入饲养细胞、融合后的细胞，200 μl/孔。所以在加选择培养液时应加3倍量的HAT。我
一、体内、外细胞的差异和分化1、差异：细胞离体后，失去了神经体液的调节和细胞间的相互影响，生活在缺乏动态平衡的相对稳定环境中，日久天长，易发生如下变化：分化现象减弱；形态功能趋于单一化或生存一定时间后衰退死亡；或发生转化获得不死性，变成可无限生长的连续细胞系或恶性细胞系。因此，培养中的细胞可视为一种
无血清培养基的出现是培养基发展历程上的一个里程碑，其一般是在合成培养基的基础上，引入成分完全明确的或部分明确的血清替代成分，使培养基能满足动物细胞培养的要求，又可有效的克服因使用血清所引发的问题。进入20世纪80年代后，新的无血清培养基不断问世，人们经过研究发现，只要在培养基中增加某些适于细胞生长的
经历了天然培养基、合成培养基后，无血清培养基和无血清培养成为当今细胞培养领域的一大趋势。采用无血清培养可降低生产成本，简化分离纯化步骤，避免病毒污染造成的危害。 无血清培养基(serum free medium,SFM):是不需要添加血清就可以维持细胞在体外较长时间生长繁殖的合成培养基。但是它们
经历了天然培养基、合成培养基后，无血清培养基和无血清培养成为当今细胞培养领域的一大趋势。采用无血清培养可降低生产成本，简化分离纯化步骤，避免病毒污染造成的危害。 无血清培养基(serum free medium,SFM):是不需要添加血清就可以维持细胞在体外较长时间生长繁殖的合成培养基。但是
细胞培养板作为培养细胞的一种常用和重要的工具，形状、规格、用途多样。 你是否也为如何选择适合的培养板而迷茫？ 你是否正为如何方便、正确使用培养板而苦恼？ 你对如何处理培养板是否也有困惑？ 对不同的培养板各有什么妙用你又有何体会？ 细胞培养板的选择 1）细胞培养板依底部形状的不同可分为
实验概要 经历了天然培养基、合成培养基后，无血清培养基和无血清培养成为当今细胞培养领域的一大趋势。采用无血清培养可降低生产成本，简化分离纯化步骤，避免病毒污染造成的危害。 实验原理 无血清培养基(serum free medi
一、概述1 当前细胞培养和观察的常用方法十九世纪起，当显微镜出现后，人们就开始尝试对细胞结构进行观察，并在二十世纪发展出细胞的培养技术。单层细胞的培养相对方便，而且商业化的显微镜非常适合于平面的、薄样品的观察，所以，在二十世纪的中后期，人们普遍采用 2D 的细胞培养方法，进行生物学的研究，以及进
一、体内、外细胞的差异和分化1、差异：细胞离体后，失去了神经体液的调节和细胞间的相互影响，生活在缺乏动态平衡的相对稳定环境中，日久天长，易发生如下变化：分化现象减弱；形态功能趋于单一化或生存一定时间后衰退死亡；或发生转化获得不死性，变成可无限生长的连续细胞系或恶性细胞系。因此，培养中的细胞可视为一种
第一章 细胞培养的基本原理与技术现代生物技术一般认为包括基因工程技术、细胞工程技术、酶工程技术和发酵工程技术，而这些技术的发展几乎都与细胞培养有密切关系，特别是在医药领域的发展，细胞培养更具有特殊的作用和价值。比如基因工程药物或疫苗在研究生产过程中很多是通过细胞培养来实现的。基因工程乙肝疫苗很多是以
如今,单克隆抗体药物以其独特的作用机制及高效性,在肿瘤和自身免疫疾病的治疗中发挥了不可估量的作用,成为全球的研发热点，目前已有2400个单克隆抗体药物处于研发及商业化阶段。 1975年杂交瘤技术问世[1]。1986年鼠源单克隆抗体药物Muromonab的上市拉开了单克隆抗体发展的序幕。
下面为美国标准细胞库或细胞银行（ATCC）入库细胞的基本要求： （1）培养简历 组织来源日期、物种、组织来源、性别、年龄、供体正常或异常健康状态，细胞已传代数等。 （2）冻存液 培养基和保护剂名称。 &
1975年，Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合，形成的杂交细胞既可产生抗体，又可无限增殖，从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破不仅为医学与生物学基础研究开创了新纪元，也为临床疾病的诊、防、治提供了新的工具。 制备单克隆抗体包括动物免疫
流式细胞术工作原理是在细胞分子水平上通过单克隆抗体对单个细胞或其他生物粒子进行多参数、快速的定量分析。它可以高速分析上万个细胞，并能同时从一个细胞中测得多个参数，具有速度快、精度高、准确性好的优点，是当代最先进的细胞定量分析技术之一。光源、液流通路、信号检测传输和数据的分析系统是流式细胞仪的主要组成
无血清培养基(serum free medium,SFM):是不需要添加血清就可以维持细胞在体外较长时间生长繁殖的合成培养基。但是它们可能包含个别蛋白或大量蛋白组分。虽然基础培养基加少量血清所配制的完全培养基可以满足大部分细胞培养的要求，但对有些实验却