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实验材料含 32P 标记的蛋白质的样品试剂、试剂盒荧光墨水／染料碳酸氢铵2-巯基乙醇SDS载体蛋白（溶于去离子水中）三氯乙酸（TCA）乙醇过氧化氢甲酸TPCK-处理的胰蛋白酶（溶于去离子水／ HCl ）电泳缓冲液绿色标记染料层析缓冲液仪器、耗材单边剃刀刀片／手术刀片闪烁计数器1.7 ml 微量离心管一次性的组织研磨件摇床台式离心机纤维素薄层色谱板小体积可调移液器由韧性塑料制成的一次性长吸头带滤器的空气管HTLE 7000 电泳装置聚乙烯膜电泳芯子层析缸风扇65℃ 烘箱实验步骤实验试剂仪器的具体要求和准备见「其他」。1. 用 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分离含有 32P 标记的蛋白质样品。2. 电泳后，干胶，四周边缘用荧光墨水标记，对 X 射线胶片曝光（放射自显影）。3. 通过与胶片上的凝胶四周荧光标记的位置的比对确定蛋白质的位置。将胶片与干胶钉在一起，胶片朝下放入一个光盒里。在胶的背面用软铅笔或圆珠笔......阅读全文
实验材料 含 32P 标记的蛋白质的样品 试剂、试剂盒 荧光墨水／染料碳酸氢铵2-巯基乙醇SDS载体蛋白（溶于去离子水中）三氯乙酸（TCA）乙醇过氧化氢甲酸TPCK-处理的胰蛋白酶（溶于去离子水／ HCl ）电泳缓冲液绿色标记染料层析缓冲液 仪器、耗材 单边剃刀刀
基本方案 备择方案 固相蛋白消化 辅助方案 从纤维平板上 实验方法原理 实验材料 含 32P
实验方法原理 实验材料 含 32P 标记的蛋白质的样品 试剂、试剂盒 荧光墨水／染料碳酸氢铵2-巯基乙醇SDS载体蛋白（溶于去离子水中）三氯乙酸（TCA）乙醇过氧化氢甲酸TPCK-处理的胰蛋白酶（溶于去离子水／ HCl ）电泳缓冲液绿色标记染料层析缓冲液 仪器、耗材 单边剃刀刀片／
试剂、试剂盒 甲醇PVP-360（溶于乙酸）50 mmol L 碳酸氢铵pH 8.0 仪器、耗材 PVDF 膜／硝酸纤维素膜保鲜膜／聚酯薄膜 实验步骤 1. 用 SDS-PAGE 凝胶电泳分离 32P 标记的样品，用标准的湿式或半干式蛋白质转移方法将蛋白质转
验材料 烧结的聚乙烯片TLC 平板（已分离过磷酸肽并经过放射自显影的） 试剂、试剂盒 电泳缓冲液 仪器、耗材 玻璃棒1000 μl（蓝色）移液器吸头单边剃刀刀片 实验步骤 实验材料、试剂、仪器耗材详见「其他」。 1. 用锋利的刀片小心地切去蓝色
实验材料 测序级膜蛋白酶 试剂、试剂盒 二硫苏糖醇碘代乙酰胺乙酸溶液甲酸乙酰氯 仪器、耗材 螯合琼脂糖凝胶层析介质 实验步骤 这里所述的方法概括为下列几个步骤：胰蛋白酶水解消化膜和可溶性组分中的蛋白质（见 24. 3.1 )；固相金属螯合亲和层析（IM
实验材料 测序级膜蛋白酶试剂、试剂盒 二硫苏糖醇碘代乙酰胺乙酸溶液甲酸乙酰氯仪器、耗材 螯合琼脂糖凝胶层析介质实验步骤 这里所述的方法概括为下列几个步骤：胰蛋白酶水解消化膜和可溶性组分中的蛋白质（见 24. 3.1 )；固相金属螯合亲和层析（IMAC) 富集磷酸肽（见 24. 3. 2 )；用串
实验材料测序级膜蛋白酶 试剂、试剂盒二硫苏糖醇 碘代乙酰
2D-PP 分离磷酸肽 RP-HPLC 分离磷酸肽 高分辨凝胶电泳分离磷酸肽 IMAC 分离／富集磷酸肽
实验方法原理 即使纳喷 MS/MS 技术已经成功用于直接分析蛋白酶解产生的磷酸肽但是出于以下一些原因，通常建议在质谱分析前作一些分离： (1) 磷酸肽在蛋白酶切产物中通常只占少数因此容易淹没在低率度离子产生的总背景中，肽分离技术可浓缩分析物，因此会提高信噪比。 (2