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转基因小鼠制备实验

实验材料 小鼠试剂、试剂盒 HCGPMSG透明质酸酶戊巴比妥钠仪器、耗材 显微镜镊子持卵针注射针实验步骤 1. 选取7~8周龄雌性小鼠,阴道口封闭,作为供体,下午3:00左右,每只小鼠腹腔注射PMSG(10 IU)。 2. 47~48小时后,每只小鼠腹腔注射HCG(0.8 IU),并与正常公鼠合笼;另取数只适龄母鼠(2月龄以上)作为受体,阴道口潮红,与结扎公鼠合笼。 3. 第二天上午9:00前观察供体、受体,有精栓者拿出备用。受体笼拿出作好隔离措施。 4. 10:30左右,断颈处死供体,手术取出整个输卵管,放入透明质酸酶~0.3 mg/M2液中。显微镜下,用镊子撕开输卵管壶腹部,受精卵随同颗粒细胞即一同流出。 5. 仔细观察放在透明质酸酶M2液中的受精卵,当受精卵周围的颗粒细胞脱离时,将受精卵吸出,放入M2液中洗涤,最后放在M16......阅读全文

老年性痴呆的动物模型及评价

  第一节 老年痴呆的定义   阿尔茨海默氏病(Alzheimer’s disease,AD),又称老年性痴呆,是一种与衰老相关,以认知功能下降为特征的渐进性脑退行性疾病或综合症。病人整个大脑弥散性萎缩并出现明显的病 理组织学改变——老年斑(senile plaque, SP)(或神经炎性斑,ne

老年性痴呆的动物模型及评价

  第一节 老年痴呆的定义   阿尔茨海默氏病(Alzheimer’s disease,AD),又称老年性痴呆,是一种与衰老相关,以认知功能下降为特征的渐进性脑退行性疾病或综合症。病人整个大脑弥散性萎缩并出现明显的病 理组织学改变——老年斑(senile plaque, SP)(或神经炎性斑,ne

老年性痴呆的动物模型及评价(六)

五、多重复制AD模型多重复制AD模型,是在现有模型的基础上,利用综合两种或两种以上模型方法获得的一种复合模型。这类模型可以综合获得各种已有模型特点,符合AD的多因素 发病机制。目前已有的动物模型有,将Aβ(1~40或25~35)和小剂量的IBO共同注入大鼠海马,2周后除出现神经元大量丢失外

有些突变会歪曲小鼠实验结果

  一个典型的癌细胞,其整个基因组中散布着成千上万的突变,携带着成百上千的突变基因。然而,却只有极少的驱动基因会导致诸如失控性生长等癌变性状。2009年,斯特拉顿教授在《自然》杂志上发表文章,提出了“司机突变-乘客突变”学说。他将癌变的细胞比作高速公路上飞驰的汽车。能够直接导致癌变的体细胞突变称之为

显微注射法建立转基因小鼠模型的操作流程

实验概要本实验详细介绍了显微注射法建立转基因小鼠模型的操作流程。实验原理转基因小鼠制备的基本原理是将改建后的目的基因(或基因组片段)用显微注射法注入供体小鼠的受精卵(或着床前胚胎细胞),然后将此受精卵(或着床前胚胎细胞)再植入受体动物的输卵管(或子宫)中,使其发育成携带有外源基因的转基因动物,通过分

转基因小鼠模型的建立(SOP)-1

名称:转基因小鼠模型的建立(SOP)关键词:转基因小鼠目的:在动物体研究转化基因原理:转基因动物是指染色体基因组中整合有外源基因并能遗传给后代的一类动物。整合到动物染色体基因组的外源基因称为转基因。转基因技术则是指制备转基因动物所需的一套技术,它涉及外源基因的构建、载体和受体的筛选、基因导人技术、供

老年性痴呆的动物模型及评价(三)

三、以AD发病的遗传学为基础的转基因动物模型(一)Aβ假说自从Alzheimer于1906年首次报道进行性记忆和认知功能减退的AD患者以来,以发现者名字命名的该疾病一直困扰着人们。Alzheimer注意 到病人的大脑有NFT和血管外的SP病理改变,但不能区分这是致病因子或仅仅是疾病的标志物

文献中遇到的实验动物知识:基因敲除小鼠

  投稿人:郭晓冲 中国医科大学动物部   写给看文献的你们:   我在这里想写一些看文献时可能遇到的实验动物知识,希望对大家有帮助。为了便于理解,语言偏通俗,可能不够严谨。如果大家希望深入了解实验动物专业知识,欢迎选修实验动物学。   第一集,关于基因敲除小鼠。   基因敲除小鼠(Knoc

文献中遇到的实验动物知识:基因敲除小鼠

  投稿人:郭晓冲 中国医科大学动物部   写给看文献的你们:   我在这里想写一些看文献时可能遇到的实验动物知识,希望对大家有帮助。为了便于理解,语言偏通俗,可能不够严谨。如果大家希望深入了解实验动物专业知识,欢迎选修实验动物学。   第一集,关于基因敲除小鼠。   基因敲除小鼠(Knoc

非小细胞肺癌患者终于用上了期待已久的“O”药

  今天,中国大陆首个PD-1抑制剂(nivolumab)正式开卖,非小细胞肺癌患者终于用上了期待已久的“O”药。   这是个历史性的时刻。   一周前,百时美施贵宝(BMS)公布了nivolumab在中国大陆的销售价格——只有美国的一半,也远远比其他国家和地区代购的便宜。这个价格获得了满堂彩。

转基因小鼠的“三段进阶”

小鼠转基因的“三段进阶”。这里我们说的转基因小鼠是指:将一段外源基因随机插入到小鼠基因组中,获得过量表达目的基因的小鼠模型。转基因1.0 显微注射法构建完全随机插入转基因小鼠用显微注射针将线性化的外源DNA片段直接注入小鼠受精卵的原核中,使外源基因整合到小鼠基因组中,从而获得转基因小鼠。优点:过程较

文献中遇到的实验动物知识:基因敲除小鼠

我在这里想写一些看文献时可能遇到的实验动物知识,希望对大家有帮助。为了便于理解,语言偏通俗,可能不够严谨。如果大家希望深入了解实验动物专业知识,欢迎选修实验动物学。第一集,关于基因敲除小鼠。基因敲除小鼠(Knockout Mice),人们使用复杂的方法使小鼠体内的某一个基因不表达,从而使小鼠呈现这个

国内外实验动物模型概览

  生命是“能够自我营养并独立生长和衰败的力量”,这是亚里士多德(Aristotle,公元前384—322)通过动物、植物的研究对生命的哲学概括。动物也成为古代先哲们探索生命奥秘的主要对象之一,盖伦(Galen,公元130—200)开创了动物解剖学和实验生理学,他将来源于动物的知识推广到对人体的认识

Cre-loxP 基因重组技术

re-loxP 是一种位点特异的基因重组技术,被广泛应用于特异位点的基因敲除、基因插入、基因翻转和基因易位,在真核生物和原核生物中均有广泛应用。Cre-loxP 的基本原理Cre 蛋白是一种重组酶,是causes recombination的缩写,于1981 年从 P1 噬菌体中被发现,属于 λIn

Cre-loxP 基因重组技术

re-loxP 是一种位点特异的基因重组技术,被广泛应用于特异位点的基因敲除、基因插入、基因翻转和基因易位,在真核生物和原核生物中均有广泛应用。Cre-loxP 的基本原理Cre 蛋白是一种重组酶,是causes recombination的缩写,于1981 年从 P1 噬菌体中被发现,属

单克隆抗体的制备(一)

材料1. 免疫原一旦作出制备单克隆抗体的决定后,首先要考虑的问题是使用何种免疫原(第2章)。免疫原(或抗原)可以有多种:全细胞、细胞提取物、纯化蛋白、融合蛋白、多肽、糖 类 、脂类或 D N A 等 。此外,制备单克隆抗体时不需要很纯或单一特异性的抗原,因为在单克隆抗体筛选的过程时,每个克隆

抗体筛选技术汇总

  近年来,生物药的市场需求逐年扩容,其中抗体药物因其靶向性好,治疗效果显著,在生物药中占据着举足轻重的地位,目前已经进入了抗体药物发展的黄金时代。随着抗体药的需求越来越大,抗体筛选技术的发展也是日新月异,目前应用较普遍的有杂交瘤技术、抗体文库筛选技术、纳米抗体技术和转基因小鼠抗体筛选技术。其中抗体

CRISPR/Cas9技术,热度背后的冷思考

  俞晓峰博士现任赛业模式生物副总裁、高级科学家,负责基因修饰模式动物的研发与技术服务等工作。   俞博士在遗传基因模式动物领域有超过20年研发与管理等方面的丰富经验,在干细胞相关领域及哺乳动物细胞系基因改造研究也取得了巨大成就,其研究成果多次发表在Nature Immunology、Hum Mo

人源化小鼠模型在人类疾病研究中的应用

  俞晓峰博士现任赛业模式生物副总裁、高级科学家,负责基因修饰模式动物的研发与技术服务等工作。   俞博士在遗传基因模式动物领域有超过20年研发与管理等方面的丰富经验,在干细胞相关领域及哺乳动物细胞系基因改造研究也取得了巨大成就,其研究成果多次发表在Nature Immunology、Hum Mo

人源化小鼠模型在人类疾病研究中的应用

  俞晓峰博士现任赛业模式生物副总裁、高级科学家,负责基因修饰模式动物的研发与技术服务等工作。   俞博士在遗传基因模式动物领域有超过20年研发与管理等方面的丰富经验,在干细胞相关领域及哺乳动物细胞系基因改造研究也取得了巨大成就,其研究成果多次发表在Nature Immunology、Hum Mo

老年性痴呆的动物模型及评价(五)

4.载脂蛋白E小鼠ApoE4是与AD相关联的危险因素。ApoE4对含有APP突变的FAD有促进作用,但对具有PS突变的FAD却没有作用[64]。ApoE4与AD的 发病相联不仅在病例对照研究所支持[65],而且家族性AD为基础相关研究中得到支持[66]。.现在认为,晚期发病的AD形式(发生

基因编辑新进展: 关键酶消除CRISPR-Cas技术脱靶效应

  近来全球兴起的CRISPR-Cas编辑技术是基于细菌和古细菌天然防御机制的一项技术。与真核生物体内的RNA干扰过程极为相似,CRISPR-Cas 技术能够特异性切割核酸片段,不过该技术也有可能发生非特异性切割,引起基因组非靶向位点的突变,这一问题越来越受到科研人员的关注。   CRISPR

制备转基因小鼠过程中的若干技巧

  背景:当今转基因技术迅速发展,作为模式动物的小鼠在上世纪就已经有完整的转基因制备过程。虽然技术成熟但方法单一,所以需要进行发展和改进。   方法改进:   1.在小鼠品系的选择上需要注意,尽量选择容易受胎的品系。如ICR小鼠   2.在利用显微注射法制备转基因小鼠时,质粒浓度在1.5ng/

Nature子刊:延缓衰老的一种新策略

  细胞损伤的逐渐积累,在衰老的起源中起着非常重要的作用。然而,许多细胞损伤的来源——有些可真正引起衰老,有些对衰老来说是无关紧要的,仍然是一个缺乏答案的问题。  衰老的氧化假说——也被称为自由基假说,是在1956年由Denham Harman提出。自那时以来,想证明“氧化损伤与衰老相关”的绝大多数

基因告诉你为什么睡眠不足脾气坏

  如果你开夜车或熬夜追剧,那么在第二天你可能会感觉脾气暴躁。如果你连续几个星期或几个月没有得到足够的睡眠,你可能会患上抑郁症或其他长期的情绪问题。最近,霍华德休斯医学研究所(HHMI)的研究人员,已经发现了这背后的一个可能的原因。   HHMI研究员、世界著名转化神经遗传学家、美国国家医科院院士、

华大科技与华大方舟联合推出基因工程小鼠技术平台

  2012年8月7日,华大基因科技服务有限公司(简称“华大科技”)和深圳华大方舟生物技术有限公司(简称“华大方舟”)联合推出基因工程小鼠技术平台,该平台克服了传统转基因小鼠生产技术中目的片段随机插入、完整性较差等难题,优化了转基因小鼠的生产过程,大大提高了研制效率及稳定性,且具有性别可控

基因工程小鼠命名规则

基因工程小鼠的命名规则有没有发现,当你在查询或看paper时,往往会蹦出几个贼长的,还夹杂着数字、上标、符号的名称,比如:129-Trp53tm1Holl/J、FVB-Tg(PomcCre)5Brn...... 看上去很复杂的样子。这些其实是基因工程小鼠的全名。如果把这一长串字符解构一下,常见的基因

抗体制备中你最关心的问题

  抗体制备是免疫学研究的基础。制备一个合适的抗体将会决定着免疫实验的成败。抗体制备过程涉及到很多个方面,比如免疫原如何设计、免疫过程的优化、目的抗体筛选、抗体纯化、应用鉴定等。接下来我们将会对一些关键的技术难点进行解答。   1. 免疫原是如何设计的?有什么原则?   解答:免疫原可以是天然蛋

体内处理精原干细胞产生转基因小鼠的试验方法

实验概要本试验描述了通过体内处理小鼠精原干细胞产生转基因小鼠的技术,其成功率高。在此次研究中通过的将幼鼠的精原干细胞(SSCS)与重组慢病毒表达的EGFP   -F在体内感染,然后与正常雌性交配。转基因可遗传和前处理的小鼠可在多次交配试验中使用。这项技术可以适用于模拟接近人类发展和疾病的实

显微注射技术:跨越百年的不老传奇

  江湖寒,刀锋冷,人断肠。问世间江湖,几许清醒,几许梦寒?狂歌以后,路遥遥,风沙厉!   ——古龙   时光荏苒,岁月穿梭,现已是公元2019年,回望2018,请允许小编以这古龙先生之词怀金庸先生之作。2018,注定是不平凡的一年,生命科学领域可谓是悲喜交加,前有科学家利用单细胞分离与单细胞