逆转录酶原位PCR实验
这一部分介绍了一种原位 PCR，特别是逆转录酶原位 PCR 的简略方法。详细讨论了其中的每个实验程序。本实验来源于 PCR 实验指南（第二版），作者：种康，瞿礼嘉。实验方法原理原位 PCR 仪，盖玻片，培养箱，湿盒，RT-PCR 试剂盒，Permount实验材料组织样品和细胞培养物试剂、试剂盒Nuclear Fast Red甲醛缓冲液检测溶液DEPC 处理的水PBSKH2P04二甲苯乙醇牛血清白蛋白SSCNBT BCIP 显色剂胃蛋白酶DNA 酶Taq DNA 聚合酶RNA 酶 inhibitorDNA 酶缓冲液dUTP抗地高辛的偶联物PCR 引物仪器、耗材原位 PCR 仪盖玻片培养箱湿盒RT-PCR 试剂盒Permount实验步骤一、材料1. 缓冲液和溶液Nuclear Fast Red10%(体积分数）甲醛缓冲液 (Polyscientific)检测溶液（0.1mol/LTris-HCl、pH9.5，0.1mol/LNaCl......阅读全文
实时－PCR－实验
试剂、试剂盒 PCR Super Mix-UDG ROX 染料 蒸馏水 反向引物 正向引物 仪器
实时－PCR－实验
本方法运用 PlatinumQuantitativePCRSuperMix-UDG。进行实时 PCR 时，应该有一套设备可以检测每次 PCR 循环时释放的荧光信号。并且还能检測 FAM 和 JOE 激发后分别释放出的 520mn 和 550nm 的发射波。本实验来源于 PCR 实验指南（第二版），作
降落PCR实验
实验材料 基因样品仪器、耗材 PCR实验步骤 1. 反应体积为50 μl。2. 人CD137胞膜外区基因的PCR扩增体系：CD137-pCDNA3质粒4 μl，P1，P2各0.5 μmol/L，MgCl2 2 mmol/L，dNTP 0.4 mmol/L，Taq 5 U。3. hIgG1Fc片
PCR实验操作
PCR实验操作 PCR是极为重要的DNA增殖技术，应用层面非常广，其中包括了核酸探针的制备。如果一段DNA已经被次选殖至载体上，要以PCR扩增这段DNA时，可根据质体multiple cloning sites两边的序列，选用适当的核酸引子 （universal primers） 进行扩增反
诱变－PCR－实验
试剂、试剂盒 氯仿 异戊醇乙醇矿物油或者一个蜡珠3mol L NaOAc5 mmol L MnCl2突变 PCR 缓冲液DNA 聚合酶Native Taq 或 AmpliTaq DNA 聚合酶高纯度的脱氧核苷 5'-三磷酸dNTP 混合物模板 DNA引物琼脂糖凝胶用溴化乙锭染色仪器、
定量PCR实验
实验材料 限制性内切核酸酶反转录酶热稳定 DNA 聚合酶dCTP靶核酸试剂、试剂盒 扩增缓冲液dNTP 贮存液胎盘 RNase 抑制剂仪器、耗材 琼脂糖凝胶或聚丙烯酰胺凝胶屏蔽型枪头离心管正向排液式移液器PCR 仪实验步骤 一、材料1. 缓冲液与溶液10X 扩增缓冲液4 种 dNTP 贮存液（20
诱变－PCR－实验
试剂、试剂盒 氯仿 异戊醇 乙醇 矿物油或者一个蜡珠 3mol L NaOAc 5 mmol L MnCl2 突变 PCR 缓冲液
诱变－PCR－实验
诱变 PCR 最大的优势是以一种没有偏好的方式引入了各种类型的突变，而不是获得高水平的单一的扩增。本实验来源于 PCR 实验指南（第二版），作者：种康，瞿礼嘉。试剂、试剂盒氯仿 异戊醇乙醇矿物油或者一个蜡珠3mol L NaOAc5 mmol L MnCl2突变 PCR 缓冲液DNA 聚合酶Nati
PCR实验操作
PCR是极为重要的DNA增殖技术，应用层面非常广，其中包括了核酸探针的制备。如果一段DNA已经被次选殖至载体上，要以PCR扩增这段DNA时，可根据质体multiple cloning sites两边的序列，选用适当的核酸引子 （universal primers） 进行扩增反应；比较常用的引子包括S
双重PCR实验
随着转基因农作物的大量种植，其安全性问题也日益受到人们的重视。2002年我国要求对转基因农作物实行标签管理。抗草甘膦（glyphosate）大豆 （商品名，roundup ready soybean）是在传统大豆株Variety A5403中转入外源基因CAMV-35S启动子、抗草甘膦基因CP4-E
实时－PCR－实验
试剂、试剂盒 PCR Super Mix-UDGROX 染料蒸馏水反向引物正向引物仪器、耗材 ABIPRISM7700 型号系列检测系统实验步骤 一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂以 50ul 反应体系为例。Platinum Quantitative PCR Super Mix-UDG(Invitro
PCR实验技术
PCR实验技术 PCR（聚合酶链式反应） 【原理】 PCR（polymerase chain reaction）用于在体外将微量的目标DNA大量扩增，以便进行分析。反应体系：①样品DNA；②引物（primer），是人工合成的一对寡核苷酸
pcr实验步骤
一、 样品RNA的抽提1. 取冻存已裂解的细胞，室温放置5分钟使其完全溶解。2. 两相分离 每1 ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2 ml的，盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后，15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12 000 rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚相，中间层以
免疫PCR实验
实验方法原理 免疫PCR主要由两个部分组成，第一部分的免疫反应类似于普通的酶联免疫吸附试验（ELISA）的测定过程；第二部分即通常的PCR检测，抗原分子的量最终由PCR产物的多少来反映。第一步中，首先用待测抗原（如牛血清白蛋白（ESA））包被微滴板孔，再加入相应的特异抗体，于是抗体就与固相上的抗原结
菌落PCR实验
菌落PCR标签： 菌落 PCR菌落PCR（Colony PCR）可不必提取基因组DNA，不必酶切鉴定，而是直接以菌体热解后暴露的DNA为模板进行PCR扩增，省时少力。建议使用载体上的通用引物。通常利用此方法进行重组体的筛选或者DNA测序分析。最后的PCR产物大小是载体通用引物之间的插入片断大小。
定量PCR实验技术－QPCR
Quantitative PCRJoseph SambrookPeter Maccallum Cancer Institute and The University of Melbourne, AustraliaDavid W. RussellUniversity of Texas Southwes
反向PCR－（inversePCR）实验步骤
nverse-PCR是克隆插入片段侧翼序列非常有效的方法。通常采用的Tail-PCR假阳性太多，而Inverse-PCR一般只要有特异条带，基本上就是目的片段。基本步骤如下：1、反向PCR（Inverse PCR）原理：反向PCR是克隆T-DNA插入位点侧翼DNA序列非常有效的方法。a. 选择合适的
反向PCR－（inversePCR）实验步骤
inverse-PCR是克隆插入片段侧翼序列非常有效的方法。通常采用的Tail-PCR假阳性太多，而Inverse-PCR一般只要有特异条带，基本上就是目的片段。基本步骤如下：1、反向PCR（Inverse PCR）原理：反向PCR是克隆T-DNA插入位点侧翼DNA序列非常有效的方法。a. 选择合适
反向PCR－（inversePCR）实验步骤
inverse-PCR是克隆插入片段侧翼序列非常有效的方法。通常采用的Tail-PCR假阳性太多，而Inverse-PCR一般只要有特异条带，基本上就是目的片段。基本步骤如下：1、反向PCR（Inverse PCR）原理：反向PCR是克隆T-DNA插入位点侧翼DNA序列非常有效的方法。a. 选择合适
PCR实验如实预防实验污染
进行PCR操作时，操作人员应该严格遵守一些操作规程，zui大程度地降低可能出现的PCR污染或杜绝污染的出现。1.划分操作区：目前，普通PCR尚不能做到单人单管，实现完全闭管操作，但无论是否能够达到单人单管，均要求实验操作在三个不同的区域内进行，PCR的前处理和后处理要在不同的隔离区内进行：(1)标本
PCR实验如实预防实验污染
进行PCR操作时，操作人员应该严格遵守一些操作规程，最大程度地降低可能出现的PCR污染或杜绝污染的出现。划分操作区：目前，普通PCR尚不能做到单人单管，实现完全闭管操作，但无论是否能够达到单人单管，均要求实验操作在三个不同的区域内进行，PCR的前处理和后处理要在不同的隔离区内进行：(1)标本处理区，
PCR－扩増实验
试剂、试剂盒 dNTP混合物 基因特异的正向引物 基因特异的反向引物 单链cDNA TaqDNA聚合酶 RT-PCR缓冲液
FDDPCR－实验
试剂、试剂盒 cDNA 矿物油 仪器、耗材 热循环仪 薄壁 PC
多元实时－PCR－实验
试剂、试剂盒 PCR Super Mix-UDGROX 染料蒸馏水反向引物正向引物 仪器、耗材 ABIPrism7700型号系列检测系统 实验步骤 一、材料 1. 缓冲液、溶液和试剂 以50ul反应体系为例。 Platinum Quantitative PCR Su
FDDPCR－实验
本方案设计为 24 个 PCR 反应，使用 3 种 cDNA 亚群（利用方案 3 中的 H-T11M 引物进行 RT 反应），引物为荧光染料标记的锚定引物（FH-T11M) 与 24 种上游任意引物 (HAP) 的组合。本实验来源于 PCR 实验指南（第二版），作者：种康，瞿礼嘉。试剂、试剂盒cDN
多元实时－PCR－实验
多元实时 PCR 时，在一个反应管中加入不同标记的成对引物，从而可以同时分析多个不同的基因。在许多反应中，用 JOE 标记看家基因对模板定量，用 FAM 标记目的基因,证明 LUX 引物非常有效。在标准的多元体系中，使用的引物浓度和加入的体积与进行一元反应时相同，如下。本实验来源于 PCR 实验指南
PCR实验技巧5
Trouble shooting guide 1．假阴性，不出现扩增条带 PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量， ④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。 模板：①模板中含有杂蛋白质，②模板中含有Taq酶抑制剂，③模板中蛋白质没有消化除净，特别是染
PCR实验技巧5
Trouble shooting guide 1．假阴性，不出现扩增条带 PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量， ④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。 模板：①模板中含有杂蛋白质，②模板中含有Taq酶抑制剂，③模板中蛋白质没有消化除净，特别是染
FDDPCR－实验
试剂、试剂盒 cDNA矿物油仪器、耗材 热循环仪薄壁 PCR 管实验步骤 一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂矿物油（可选）2. 核酸和寡核苷酸来自方案 3 的 cDNA3. 专用设备热循环仪 [推荐使用 GeneAmpPCRSystem9600(Perkin-Elmer)，或者 Mastercyder
PCR－扩増实验
这一方案设计包含 10 个反应还多 10%, 每次奇数循环之后相应地从 PCR 仪中取出样品，由第 15 个循环起始，到第 35 个循环终止。本实验来源于 PCR 实验指南（第二版），作者：种康，瞿礼嘉。试剂、试剂盒dNTP混合物基因特异的正向引物基因特异的反向引物单链cDNATaqDNA聚合酶RT