24~48h需氧菌计数新方法

本文使用生物梅里埃TEMPO AC卡片，与培养温度分别为35℃和32℃的AOAC 966.23、乳制品标准检测方法（SMEDP）以及30℃的EN ISO 4833方法进行平行实验检测食品中的菌落总数。结果表明，对绝大多数食品样本，TEMPO AC较传统的平板计数法可以更早报告菌落总数的测试结果：35℃-22~28h（AOAC RI验证）；30℃-24~28h（ISO 16140验证）报告结果；对所有食品样品在40~48h内报告结果。

在食品工业中，快速的质量控制方案对于货架期较短的生鲜产品检测来说至关重要，这其中也包括对总嗜中温菌的定量计数检测。及时、快速的检测报告无疑能够为食品生产商和检测实验室带来更多益处和竞争力。

相比传统方法 ISO 4833菌落总数 （Aerobic Plate Count APC-30℃-72h）以及BAM 966.23/SMEDP方法（Aerobic Plate Count- 35℃/32℃-48h）， 目前 TEMPO细菌总数（Total Viable Count） TVC卡片可以在2天内报告各种食品样本（自身酶活性很强的食品除外）的细菌总数结果。TEMPO AC则可以在更短的时间内报告菌落总数结果，在35℃-22~28h（AOAC RI验证），30℃-24~28h（ISO 16140验证）报告结果，以及对所有样品（包括自身高酶活性食品）在30℃-40~48h内报告结果。本文将这种新方法与 ISO以及BAM/SMEDP参考方法进行比较和分析讨论。

材料与方法

材料选择：选择9种食品种类进行测试，包括乳制品、肉类/禽类、蛋类及其衍生产品、鱼肉和海鲜产品、水果和蔬菜、谷类和坚果类、面包和糖果、多组分食品、宠物食品 （冷藏、冷冻、煮熟、脱水、烟熏或腌制加工）。试验目的是选择这一系列不同种类的食品样本，特别是在TVC卡片局限性说明中提到检测有难度的食品，如生红内脏，生鲜软壳动物，胡桃，榛子，杏仁，生面团，蛋糕粉，脱水汤包和调味包，香料等自身酶活性较强的食品，以此来验证这些食品在TEMPO AC卡片上的使用性能。

本次试验检测了超过120个自然条件下受污染的样品。使用TEMPO AC卡片与培养温度分别为35℃和32℃的AOAC 966.23、乳制品标准检测方法（SMEDP）以及30℃的EN ISO 4833方法进行平行实验，并将数据进行统计和分析。

参考方法：NF ISO 4833方法（May 2003）APC，30℃±1℃/72h±3h或BAM 966.23/SMEDP方法（Aerobic Plate Count APC-35℃/32℃-48h）。每个测试样品首先制备1:10的初次稀释液，选择合适的计数范围做连续的10倍稀释。每个稀释度转移1ml到无菌平板，倾注平板计数琼脂（plate count agar，PCA）。

将平板放置在30℃培养72±3h 或者35℃/32℃培养48h±3h，并对培养后平板进行菌落计数并报告。

TEMPO AC方法：30℃±1℃/ 44h±4h或35℃±1℃/25h±3h。在TEMPO AC培养基瓶中加入3ml无菌水，再吸取1ml经过初次1:10稀释的稀释液（或合适的10倍稀释液，这取决于样品污染程度），将培养基瓶漩涡振荡5s，之后使用TEMPO充填仪将稀释液自动转移到TEMPO AC卡片中并自动封口。将TEMPO AC卡片放置在30℃±1℃培养41h±1h到47h±1h 或在35℃/32℃±1℃培养24h±1h。达到培养时间后将AC卡片放入TEMPO读数仪中读取测试结果并自动打印最终报告。

结果与讨论

由以上结果可以看出，TEMPO AC方法与传统方法测试结果相比一致性为98.4%（表1）和95.6%（表2），两种定量计数方法的偏差为0.06和-0.11（表1和表2）。

总体而言，自动化方法TEMPO AC与两种经典的传统方法测试结果相比无明显差异，但要比传统方法提前一天报告结果。

小结

使用自动化方法TEMPO AC与传统方法（NF ISO 4833、AOAC 966.23以及乳制品标准检测方法（SMEDP）检测多种食品类型样品（包括高酶活性产品）时， 检测结果经比较后无显著差异。而自动化方法用于食品指标菌检测除具有高通量、可溯源、简化工作流程以外，指标菌的报告时间可望由传统方法的2~3天缩短为“明日”报告。