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染料配基层析不是真正意义的亲和层析，因为它们并不是与它们结合的蛋白质的天然配基。然而染料柱能很好地结合蛋白质，并能导致满意地纯化蛋白质。事实上，有时这种结合甚至比正常的配基更紧。染料配基柱通常是廉价和稳定的，并且具有较高的蛋白质结合容量。所以染料配基层析能作为蛋白质纯化中有价值的步骤之一。来源：《蛋白质技术手册》实验方法原理选择纯化特异蛋白质的适宜染料一般是通过反复试验比较后决定。Cibacron Blue F3GA，作为该领域的先驱染料与烟酰胺腺嘌呤二核苷酸很相似，并且一直用于纯化激酶、水解酶、聚合酶和其他核苷酸依赖的蛋白质。但是这种结合特异性不是绝对的，Cibacron Blue 也用于不具有核苷酸结合功能的各种蛋白质的纯化。蛋白质与染料的结合可能涉及疏水、静电或氢键结合力等。因此，尽管有市售的筛选各种染料的试剂盒，选择纯化给定蛋白质的最佳染料也没有现成的方法可楯。Scopes 按照与蛋白质结合的能力将染料分类，并推荐了一个......阅读全文
染料配基层析不是真正意义的亲和层析，因为它们并不是与它们结合的蛋白质的天然配基。然而染料柱能很好地结合蛋白质，并能导致满意地纯化蛋白质。事实上，有时这种结合甚至比正常的配基更紧。染料配基柱通常是廉价和稳定的，并且具有较高的蛋白质结合容量。所以染料配基层析能作为蛋白质纯化中有价值的步骤之一。来源：《蛋
染料配基法 实验方法原理 选择纯化特异蛋白质的适宜染料一般是通过反复试验比较后决定。Cibacron Blue F3
配基要结合到载体上,首先要活化载体上的功能基团,再将配基连接到活化基团上。此偶联反应必须在温和条件下进行,不致使配基和载体遭到破坏;且偶联后要反复洗涤载体,以除去残存的未偶联的配基,还要测定偶联的配基的量。 最常用的载体是琼脂糖4B(Sepharose4B)。把琼脂糖与溴化氰在pH值为11条件
6.仿生配基大部分的亲和层析配基是天然存在的，其优点在于具有高度选择性和强结合能力，但也存在某些缺点。这种配基稳定性低，需要进行纯化，使用过程中批间差异大，易被其他生物分子污染，对灭菌方法敏感，并且成本高。为了克服这些局限性，加速亲和层析在治疗性蛋白质纯化中的应用, 仿生型配基 (biomime
实验方法原理 在疏水层析的主要支持介质上含有大小不等的疏水侧链，烷基或芳香基，可是绝大多数情况起作用的是苯基或辛基。当碳氢链长度增加，即变得更疏水时，疏水强的少量蛋白质被吸附。这时疏水相互作用太强，需用极端方法洗脱，可能会导致蛋白质变性。苯基琼脂糖比辛基琼脂糖疏水性低，是疏水纯化中效果不错的常用介质
疏水作用层析法 实验方法原理 在疏水层析的主要支持介质上含有大小不等的疏水侧链，烷基或芳香基，可是绝大多数情况起作用的是苯
疏水相互作用层析是以介质疏水基团和蛋白质疏水区域间的亲和作用为基础的。疏水力是浸在一种极性液体（如水）中的非极性物质的排斥力。胞膜蛋白都具有一个明显的疏水区域以锚定在膜上。可溶性蛋白质在外表面上可能存在疏水小区，它促进蛋白复合物的形成，也可能是疏水配基结合部位或活性部位。这些暴露的疏水区对疏水
7．密度 多数蛋白质的密度在1.3~1.4g/cm3之间，分级分离蛋白质时一般不常用此性质，不过对含有大量磷酸盐或脂质的蛋白质与一般蛋白质在密度上明显不同，可用密度梯度法离心与大部分蛋白质分离。 8．基因工程构建的纯化标记 通过改变cDNA在被表达的蛋白的氨基端或羧基端加入少许几个额外氨基酸，这个
凝胶过滤层析是一项重要的蛋白质纯化技术，又称为大小排阻、凝胶排阻、分子筛或凝胶过滤层析这种方法利用分级分离，而不需要蛋白质的化学结合，这就明显降低了因不可逆结合所致的蛋白质损失和失活。另外，可利用此法更换蛋白质的缓冲液或降低缓冲液的离子强度。在蛋白质纯化操作中何时使用凝胶过滤，还不能一概而论，有时纯
压片法常用的染料(1) 醋酸洋红 为压片法中最常用的染料。配制方法是：先将100 毫升45% 醋酸水溶液放于烧瓶中煮沸，移去火焰，停止加热。然后缓慢加入1 克洋红粉末，全部加入后再煮沸1-2 分钟。此时可将一枚生锈铁钉用棉线悬入溶液中约1 分钟后取出（铁为媒染剂）。静置12 小时后经过过滤，放入磨口