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不得不看的载体构建的心得与体会

这两年在美帝净做克隆实验了,以前读PHD时候还觉得自己分子克隆挺牛X的,来这边之后做了各种各样的构建才知道以前是坐井观天,刚才粗粗统计了一下,在美帝一年零八个月,我构建的质粒的超过四百个,其中有很简单从PCR构建到拿WB结果的一共不到一周,也有巨难的花了四个月时间换了几次strategy才弄好激动得我半夜給老板发信的品种;有单片段酶切插入这种不用脑型的,也有九个片段逐一插入正反向还不同的。专家不敢说,但是熟能生巧,确实积累了不少经验,现在系里从POSTDOC到PHD学生到TECH构建前很多人都跟我商量(做博后结果成了技术员的人生真悲哀啊)。我老板甚至开玩笑说,我们将来开个公司,我专门负责构建(这话听得我想揍他大家同意不?)想了想还是把经验写下来,一来做个记录,二来博同行一笑,能让大家少绕点弯路则更好。1. 准备工作俗话说用欲善其事,必先利其器。我强烈建议大家在做构建之前先找好工具,这样起的效果事半功倍。这里说个笑话,我们系有个新......阅读全文

不得不看的载体构建的心得与体会

这两年在美帝净做克隆实验了,以前读PHD时候还觉得自己分子克隆挺牛X的,来这边之后做了各种各样的构建才知道以前是坐井观天,刚才粗粗统计了一下,在美帝一年零八个月,我构建的质粒的超过四百个,其中有很简单从PCR构建到拿WB结果的一共不到一周,也有巨难的花了四个月时间换了几次strategy才弄好激动得

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酶标仪的基本操作,新手不得不看!

 酶标仪是酶联免疫吸附试验的仪器又称微孔板检测器。可简单地分为半自动和全自动两大类,但其工作原理基本上都是一致的,其核心都是一个比色计,即用比色法来进行分析。 测定一般要求测试液的体积在250μL以下,用一般光电比色计无法完成测试,因此对酶标仪中的光电比色计有特殊要求。     酶标仪的功能是用

酶标仪的基本操作,新手不得不看!

 酶标仪是酶联免疫吸附试验的仪器又称微孔板检测器。可简单地分为半自动和全自动两大类,但其工作原理基本上都是一致的,其核心都是一个比色计,即用比色法来进行分析。 测定一般要求测试液的体积在250μL以下,用一般光电比色计无法完成测试,因此对酶标仪中的光电比色计有特殊要求。   酶标仪的功能是用来读取酶

siRNA表达载体的构建

            实验方法原理 多数的siRNA表达载体依赖三种RNA聚合酶III 启动子(pol III)中的一种,操纵一段小的发夹RNA(short hairpin RNA, shRNA)在哺乳动物细胞中的表达。这三类启动子包括大家熟悉

植物表达载体的构建

实验概要 本实验介绍了一种构建植物表达载体的方法。 实验步骤 1. 植物正义表达载体的构建     1) 用SmaI和SacI双酶切pTriplEx2-GhMT3a和植物表达载体pBI121:     2) 进行琼脂糖凝胶电泳,回收GhMT3a片段和pBI121载体;     3) 连

siRNA表达载体的构建

实验方法原理 多数的siRNA表达载体依赖三种RNA聚合酶III 启动子(pol III)中的一种,操纵一段小的发夹RNA(short hairpin RNA, shRNA)在哺乳动物细胞中的表达。这三类启动子包括大家熟悉的人源和鼠源的U6启动子和人H1启动子。之所以采用RNA pol

siRNA表达载体的构建

siRNA表达载体构建可应用于:(1)作为后基因组时代基因功能分析的有力工具;(2)基因组学、细胞信号传导通路分析;(3)药物靶点筛选、疾病治疗。实验方法原理多数的siRNA表达载体依赖三种RNA聚合酶III 启动子(pol III)中的一种,操纵一段小的发夹RNA(short hairpin RN

sgRNA的设计与载体构建

实验概要1. CRISPR的介绍:       CRISPR的全称为Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic  Repeats(规律成簇的间隔短回文重复序列)。实际上就是一种基因编辑器,由于细菌自身具有降解入侵的病毒DNA或其他外源DNA的免

Nature杂志1月不得不看的亮点研究

  不知不觉,1月即将结束了,在即将过去的1月里Nature杂志又有哪些亮点研究值得阅读呢?小编对此进行了整理,与各位一起学习。   【1】Nature:附带致死性或有助开发出治疗胰腺癌的新方法   doi:10.1038/nature21052   癌细胞经常剔除在正常情形下抑制肿瘤形成的