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快速了解染色质免疫共沉淀技术(ChIP)

ChIP技术的原理 在生理状态下把细胞内的DNA与蛋白质交联在一起,通过超声或酶处理将染色质切为小片段后,利用抗原抗体的特异性识别反应,将与目的蛋白相结合的DNA片段沉淀下来,以富集存在组蛋白修饰或者转录调控的DNA片段,再通过多种下游检测技术(定量PCR、基因芯片、测序等)来检测此富集片段的DNA序列。(检测相关技术服务:Real-time PCR技术服务、基因芯片及结果验证服服务、高通量测序及结果验证服务) ChIP技术实验步骤 染色质免疫共沉淀技术包括3个独立的步骤,即固定、沉淀和检测。 第1步 固定 甲醛能有效的使蛋白质-蛋白质,蛋白质-DNA,蛋白质-RNA交联,形成生物复合体,防止细胞内组分的重新分布。首先在体内用甲醛固定DNA和蛋白质复合物,需要注意甲醇的交联时间,如果过长,细胞染色质难以用超声波破碎,影响ChIP结果,而且实验材料也容易在离心过程中丢失;交联时间如果过短,则交......阅读全文

盘点:31项与免疫学有关的分子生物学实验技术

  现代分子生物学和免疫学的进展加深了我们对许多疾病的了解,并且导致了免疫新策略的产生,免疫学检测方法可分为体液免疫和细胞免疫测定。本文盘点了与免疫学有关的分子生物学实验技术汇总。  一、GST pull-down实验  GST是指谷胱甘肽巯基转移酶,GST pull-down实验是一个行之有效的验

多名学者推荐全基因组分析转录因子功能新技术

  来自北卡罗来纳大学教堂山分校,NIH等处的研究人员利用一种新型方法,分析了酵母转录因子Rap1在整个基因组中的结合动态,从而可以更好研究这一转录因子的功能,这一方法将有助于科学家们实时分析转录情况,相关成果公布在Nature杂志上。   对于这一成果,来自法国国家科学研究中心的François

基因组的三维结构

  摘要: 阐明染色质复杂结构的技术有染色质构象捕获(chromatin conformation capture, 3C)及更高通量的衍生技术4C、5C,这些提供了长距离的染色质相互作用,但不能扩展到整个染色质相互反应组。在2009年末,两种新方法的迸发,有望绘出全基因组范围的相互作用图谱。  

干细胞牛人PNAS发布染色质蛋白组学分析法

  当下生物医学研究的一个重要特点是技术手段的革新非常快,人类基因组计划完成后,组学水平的研究使得从整体水平认识生命过程成为可能。美国怀海德生物医学研究所(Whitehead Institute for Biomedical Research)的Richard A Young博士在这方面——尤其是利

如何利用CRISPR-dCas9来研究基因调控

  顺式调控元件(TRE)和反式调控元件(CRE)一直是人们感兴趣的对象,通常利用染色质免疫沉淀(ChIP)和染色质捕获技术来研究。不过,德克萨斯大学西南医学中心的研究人员最近开发出一种新方法,结合CRISPR的靶定能力以及生物素-链霉亲和素的互作优势来鉴定TRE和CRE。  这种名为CAPTURE

Cell杂志最受关注的五篇文章(4月)

  论文的通讯作者、BIDMC癌症中心肿瘤学家、哈佛医学院医学副教授Gerburg Wulf说:“这项研究证实了PI3K作为一个主要的调控因子整合了癌细胞的结构和它的代谢。”糖分解与细胞结构是如何协调的?Wulf说,答案是一个惊人简单的生物物理机制。  Wulf解释道:“在正常细胞中,来自外部的信号

RIP 技术--研究肿瘤发生和转移中microRNA失调的有力工具

  microRNAs(miRNA)是一种内源性非编码小分子RNA,一般具有18到25个核苷酸,其序列在进化上高度保守,通过靶向特定mRNA来调节基因的表达。   miRNA是越来越受关注的转录后调控网络(post-transcriptional control)中重要的调控因子。首先,miRNA

RIP 技术--研究肿瘤发生和转移中microRNA失调的有力工具

  microRNAs(miRNA)是一种内源性非编码小分子RNA,一般具有18到25个核苷酸,其序列在进化上高度保守,通过靶向特定mRNA来调节基因的表达。   miRNA是越来越受关注的转录后调控网络(post-transcriptional control)中重要的调控因子。首先,miRNA

RIP 技术——研究肿瘤发生和转移中microRNA失调的有力工具 二

但是miRNA具有成百上千个靶标,所以要完全理解一个miRNA和靶标的特异性反应与肿瘤发生之间的联系,是一项非常具有挑战性的工作,尤其是在癌症研究中鉴别出miRNA的准确靶点仍然是一大难题。现已知道miRNA的调节功能是通过结合不同的蛋白质或RNA来实现的,因此研究miRNA与蛋白的结合情况对于揭示

RIP技术(RNA结合蛋白免疫沉淀)

RIP技术(RNA Binding Protein Immunoprecipitation,RNA结合蛋白免疫沉淀),是研究细胞内RNA与蛋白结合情况的技术,是了解转录后调控网络动态过程的有力工具,能帮助我们发现miRNA的调节靶点。RIP这种新兴的技术运用针对目标蛋白的抗体把相应的RNA-蛋白复合

RIP技术研究肿瘤发生和转移中microRNA失调的有力工具

microRNAs(miRNA)是一种内源性非编码小分子RNA,一般具有18到25个核苷酸,其序列在进化上高度保守,通过靶向特定mRNA来调节基因的表达。miRNA是越来越受关注的转录后调控网络(post-transcriptional control)中重要的调控因子。首先,miRNA结合到核糖核

中国科学院植物研究所破解果实衰老腐败的秘密

   “离本枝一日而色变,二日而香变,三日而味变。”唐朝时杨贵妃想吃上一口新鲜的荔枝,需要官方驿站快马加鞭。而如今荔枝、香蕉、猕猴桃,这些容易“烂”的水果经过科学的保鲜方式,从千里之外可以活色生香地出现在我们的餐桌上。   当你在大快朵颐鲜美的水果时,有没有想过为什么有的水果采摘之后,很快会变质呢?

再次飞跃 | 短短2天,中国学者连续发表11篇CNS

3.杨辉/李亦学/Lars M. Steinmetz等团队建立新型脱靶检测技术,基因编辑工具安全性评估或迎来新突破  CRISPR/Cas9是广泛关注的新一代基因编辑工具,自从2012年被发明以来,它一直以其高效性和特异性备受世人的期待,然而值得注意的是,CRISPR/Cas9从问世以来,其脱靶风险

高通量测序技术的原理及各平台优势和实践应用的分析

  随着人类基因组计划(human genome project )在2003年顺利完成,基因组测序技术取得了长足的进步,这直接导致了每兆基因组成本的大幅下降以及检测的基因组数量越来越多。人们对基因组的复杂性深感震惊,这也引导着测序技术的进一步发展。最近的一些突破性技术使得测序技术在更短的时间内可以

一个课题组两篇Cell发布病毒与宿主相互作用重要研究

Drug targets for Dengue, Zika and Ebola viruses。图片引自:https://www.drugtargetreview.com/news/38327/drug-targets-virus/  病毒是与其宿主共同进化数百万年的分子机器,以利用其专门的细胞内环