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1.蛋白处理：此步骤是关键，蛋白处理的好否决定结果好坏。取细胞，3000rpm 3min离心，加入含蛋白酶抑制剂（现做现加）的细胞裂解液(本实验室选择RIPA，1×106/L细胞对应100ul)，枪尖反复吹吸裂解细胞（此步非常重要，容易出现鼻涕样的液体，此为裂解不充分的缘故，所以应反复吹打或者置于振荡器上，直**鼻涕状液体消失）。冰上放置**少半小时。 2.煮蛋白：12000rpm，15min离心，吸取上清，加入Loading buffer后于沸水中煮5min后,放于-80保存。 3.清水洗玻璃板，无水酒精擦洗干净，夹胶圈，防止漏胶。 4.配制10%分离胶，加入垂直板中，再加入1ml水液封（加入TEMED立即摇匀加入，加水液封时要缓慢些，防止把胶冲变形）。 5.20分钟后，把上清水倒掉，用滤纸把剩余的水吸干。配制5%浓缩胶（按1.5倍体积配液，保证足量），立即加入分离胶上层（**不能出现空泡），立即插梳子。10-20......阅读全文
1.蛋白处理：此步骤是关键，蛋白处理的好否决定结果好坏。取细胞，3000rpm 3min离心，加入含蛋白酶抑制剂（现做现加）的细胞裂解液(本实验室选择RIPA，1×106/L细胞对应100ul)，枪尖反复吹吸裂解细胞（此步非常重要，容易出现鼻涕样的液体，此为裂解不充分的缘故，所以应反复吹打或者置
实验概要 免疫印迹是一个用于蛋白质分析的常规技术，在电场的作用下将电泳分离的蛋白从凝胶转移至一种固相支持物，然后利用抗原—抗体的特异性反应，从蛋白混合物中检测出目标蛋白，从而定量或定性地确定正常或实验条件下细胞或组织中目标蛋白的表达情况。Western blot还可用于蛋白—蛋白、蛋白—
多年来，大部分分子诊断实验室的核心技术都主要集中在检测特异性、相对较短的DNA或RNA片段上。该技术能诊断传染性疾病、鉴别影响药物代谢的特殊基因变异型或检测与疾病有关的基因，如与癌症有关的基因。这些检测的核心是实时定量聚合酶链反应（PCR）、转录调节扩增（TMA）、靶向扩增和信号扩增等类似技术的应用
Westernblot法应用分子生物学、生物化学和免疫遗传学中时常会用到的一种实验方法,并且是一种能对蛋白进行定性和半定量的分析方法。是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色,并且通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中的表达情况的信息。蛋白质分析中应用的
从图中可以看出，气相色谱仪通常由以下五个部分组成： 1)气源和载气的控制和测量 (1)气源 气源多采用高压瓶(氢、氮、氩等)做高纯气的储存器，并装有减压阀，使高压气体减压 成低压气体(0．1-O．5MPa)以供使用。钢瓶供给的气体称为流动相，又称载气。载气的作用 主要是把样
（1） 水浴锅使用时必须先加适量的洁净自来水于锅内，也可按需要的温度加入热水，以缩短加热时间。 （2）接通电源，选择温度。 配备电子式恒温器时，将“温度旋钮”顺时针调节到所需要的温度，此时为加热状态，绿色指示灯亮。当加热到所需温度时，红色指示灯亮，此时为恒温状态。 配备数显表头时，计数器
透照操作应严格遵守工艺规定，操作程序、内容及有关要求简述如下：试件检查及清理试件上如有妨碍穿透或妨碍贴片的附加物，如设备附件、保温材料等，应尽可能去除。事件表面质量应经外观检查合格，如表面不规则状态可能在底片上产生掩盖焊缝中缺陷的图像时，应对表面进行打磨休整。 划线按照工艺文件规定的检查部位、比
生物大分子印迹法实际上是凝胶电泳技术、固定化技术及分子亲和技术三者融为一体的综合性技术,其核心在于把凝胶电泳已分离的区带转移并印迹于固定化纸上。生物大分子印迹法始创于1975年,内苏格兰爱丁堡大学E.M.Southern首先提出。他将限制酶切后的DNA片段先进行琼脂糖凝胶电泳,把一张硝酸纤维素纸放在
Westernblot法即是一种将电泳与KIJSA结合起来的技术,可分为电泳、转印、酶免疫测定3个阶段。Westernblot法结合了电泳的高分辨率和酶免疫测定的高敏感性和特异性,是一种能用于分析样本组分的免疫学测定方法。
单克隆抗体技术的流程为:脾细胞和骨髓瘤细胞在聚乙二醇(PEG)作用下发生细胞融合;加入HAT选择培养基(含H、A和T)后,未融合的骨髓瘤细胞因其从头合成途径被氨基蝶呤阻断,而又缺乏HGPRT不能利用补救途径合成DNA,从而死亡;未融合的脾细胞难以在体外培养而死亡;融合细胞因从脾细胞获得HGPRT,故